背景[1-3]
ELISA包被缓冲液(10×)是一种在ELISA（酶联免疫吸附测定）实验中广泛使用的试剂，主要用于包被96孔板或其他实验器皿的孔，以便进行后续的抗原或抗体结合反应。以下是对ELISA包被缓冲液(10×)的详细介绍：
ELISA包被缓冲液(10×)
一、产品基本信息
产品名称：ELISA包被缓冲液(10×)
规格：常见的规格有100ml、500ml等，具体规格可能因不同生产厂家而异。
纯度：一般具有较高的纯度，如98%或99.99%等，确保实验结果的准确性。
储存条件：通常需要在4℃下保存，以保持其稳定性和活性。
二、产品组成
ELISA包被缓冲液(10×)主要由碳酸盐（如碳酸钠、碳酸氢钠等）、防腐剂以及可能的其他稳定剂组成，其pH值通常被调节至约9.6，以适应ELISA实验的需求。
三、产品用途
包被作用：在ELISA实验中，ELISA包被缓冲液(10×)被用于包被96孔板或其他实验器皿的孔，以便固定抗原或抗体，为后续的反应提供稳定的基底。
优化实验条件：通过调整ELISA包被缓冲液的浓度和pH值，可以优化实验条件，提高抗原或抗体与实验器皿的结合效率，从而改善实验的灵敏度和特异性。
四、使用注意事项
稀释使用：ELISA包被缓冲液(10×)为浓缩液，需要在使用前用超纯水或其他适当的溶剂稀释至1×浓度。
避免污染：在操作过程中应避免污染，确保实验结果的准确性。
储存条件：应严格按照产品说明书上的储存条件进行保存，避免阳光直射和高温环境。
有效期：注意产品的有效期，避免使用过期的ELISA包被缓冲液。
五、ELISA包被缓冲液（10×）的配制方法：
材料：
碳酸氢钠（NaHCO₃）
碳酸钠（Na₂CO₃）
去离子水
配制步骤：
准备去离子水：确保使用的去离子水质量良好，无杂质和污染物。
称取化学物质：按照以下比例称取碳酸氢钠和碳酸钠：
碳酸氢钠：3.7 g
碳酸钠：1.47 g
注意：在称取化学物质时，要确保使用准确的天平，并避免交叉污染。
溶解化学物质：将称取好的碳酸氢钠和碳酸钠放入适当的容器中，加入少量去离子水，搅拌至完全溶解。
补充去离子水：将溶液转移到量筒中，补充去离子水至所需的最终体积（通常是500 mL或1000 mL），混合均匀。
调整pH值：使用pH计测量溶液的pH值，如果需要，可以适量调整pH值至适宜的范围（通常为9.6）。
过滤和储存：使用0.22μm滤器过滤溶液，以去除可能存在的微生物和杂质。将过滤后的溶液储存于无菌、密封良好的容器中，标记清楚，存放在4℃冰箱中备用。
应用[4][5]
ELISA包被缓冲液(10×)可以用于非洲猪瘟病毒MGF110-5L-6L蛋白表达与抗体检测ELISA方法建立
研究以ASFV MGF110-5L-6L蛋白为包被抗原,建立了检测ASFV抗体的间接ELISA方法。非洲猪瘟病毒MGF110-5L-6L蛋白具有较高的免疫原性,本研究根据NCBI公布的安徽株ASFV毒株（Gen Bank:MK128995.1）的MGF110-5L-6L基因序列,通过使用跨膜区、信号肽和DNASTAR Protean等软件对其基因序列进行生物信息学分析,截取无信号肽、亲水性和抗原性较好的优势基因片段第105～205位氨基酸,并且在其下游添加6×His标签,将其克隆到原核表达载体p ET-32a（+）中,构建融合蛋白表达质粒p ET32a-MGF110-5L-6L。将重组质粒p ET32a-MGF110-5L-6L转化到大肠杆菌BL21（DE3）感受态中,由IPTG诱导表达包涵体蛋白MGF110-5L-6L,在37°C条件下诱导6 h蛋白表达量最高,经镍柱亲和层析纯化,蛋白浓度为1.50 mg/m L,通过蛋白质印迹分析表明该蛋白具有良好的反应原性。将复性后的MGF110-5L-6L截短蛋白与免疫佐剂等量混合免疫新西兰兔,共进行三次免疫,制备了家兔抗p MGF110-5L-6L多克隆抗体,效价可达1:512,000。用p CAGGS-EGFP-MGF110-5L-6L全长基因重组质粒转染293T细胞,通过Western blot检测和间接免疫荧光试验表明p MGF110-5L-6L多克隆抗体能够特异性识别MGF110-5L-6L蛋白,证明该原核表达蛋白具有良好抗原性。本研究以MGF110-5L-6L蛋白为包被抗原建立间接ELISA方法,使用棋盘滴定法确定最佳抗原包被浓度和血清稀释度,根据阳性（P）/阴性（N）≥2.1进行结果判定,最终确定最佳抗原包被浓度为4μg/m L,血清稀释度为1:400;包被缓冲液为Na2CO3-Na HCO3缓冲液及ELISA包被缓冲液(10×),包被条件为37℃温箱孵育1 h,4℃过夜包被;封闭液选用3%BSA,在37℃条件下孵育0.5 h;酶标二抗稀释度为1:2500,血清和二抗的最佳孵育时间均为1 h;TMB显色液的最佳反应时间为15 min。按照S/P值进行临界值的计算,当样本S/P值≥0.3450时,样品为阳性;S/P值<0.3450时,样品为阴性。该方法不与PRRSV、PCV2、CSFV和PRV的阳性血清发生交叉反应,并且可检测到稀释度为1:6400的阳性血清,批次内和批次间的变异系数（CV）均<10%,表明该检测方法具有良好的特异性、灵敏度和可重复性。
参考文献
[1]Structure and function of African swine fever virus proteins:Current understanding[J].Yang Sicheng;Miao Chun;Liu Wei;Zhang Guanglei;Shao Junjun;Chang Huiyun.Frontiers in Microbiology,2023
[2]A highly efficient indirect ELISA and monoclonal antibody established against African swine fever virus pK205R[J].Li Liwei;Qiao Sina;Liu Jiachen;Zhou Yanjun;Tong Wu;Dong Shishan;Liu Changlong;Jiang Yifeng;Guo Ziqiang;Zheng Haihong;Zhao Ran;Tong Guangzhi;Li Guoxin;Gao Fei.Frontiers in Immunology,2023
[3]The Indirect ELISA and Monoclonal Antibody against African Swine Fever Virus p17 Revealed Efficient Detection and Application Prospects[J].Li Liwei;Qiao Sina;Li Guoxin;Tong Wu;Dong Shishan;Liu Jiachen;Guo Ziqiang;Zheng Haihong;Zhao Ran;Tong Guangzhi;Zhou Yanjun;Gao Fei.Viruses,2022
[4]Indirect ELISA Using Multi–Antigenic Dominants of p30,p54 and p72 Recombinant Proteins to Detect Antibodies against African Swine Fever Virus in Pigs[J].Li Dexin;Zhang Qin;Liu Yutian;Wang Miaoli;Zhang Lei;Han Liyuan;Chu Xuefei;Ding Guofei;Li Yingchao;Hou Yanmeng;Liu Sidang;Wang Zhiliang;Xiao Yihong.Viruses,2022
[5]孙春喜.非洲猪瘟病毒MGF110-5L-6L蛋白表达与抗体检测ELISA方法建立[D].山东农业大学,2023.