背景[1-3]
EGR1抗体是针对早期生长应答蛋白1（Early Growth Response 1，简称EGR1）的一种特异性抗体。EGR1是一种重要的转录因子，参与了基因表达调控、细胞增殖、细胞分化和应激响应等多个细胞生物学过程。因此，EGR1抗体在科学研究中具有广泛的应用价值。EGR1（Early Growth Response 1）是一种锌指转录因子，属于即刻早期基因（immediate-early genes）家族。EGR1在多种生物过程中发挥重要作用，包括细胞增殖、分化和凋亡。它在应对细胞应激反应时迅速表达，如生长因子刺激、细胞因子作用、神经元活动以及物理损伤。
EGR1抗体
一、EGR1抗体的特性
特异性：EGR1抗体能够高度特异地结合EGR1蛋白，不与其他蛋白质或抗原发生交叉反应，确保实验结果的准确性。
多克隆性或单克隆性：根据制备方法的不同，EGR1抗体可以是多克隆抗体，由多个不同的抗体克隆组成，也可以是单克隆抗体，由单一B细胞克隆产生。多克隆抗体通常具有更广泛的识别范围，而单克隆抗体则具有更高的特异性和灵敏度。
适用性：EGR1抗体适用于多种实验技术，包括Western Blotting（WB）、免疫组织化学（IHC）、ELISA等，可用于不同类型的细胞和生物样本。
二、EGR1抗体的应用
基因表达调控研究：EGR1作为转录因子，在基因表达调控中起重要作用。EGR1抗体可用于检测细胞中EGR1蛋白的表达水平，进而研究其在基因调控中的作用机制。
细胞增殖和分化研究：EGR1在细胞增殖和分化过程中发挥关键作用。利用EGR1抗体，可以观察EGR1在细胞增殖和分化过程中的动态变化，进而揭示其调控细胞生物学过程的机制。
应激响应研究：EGR1参与了细胞的应激响应，包括细胞对外界刺激的反应。EGR1抗体可用于研究细胞在应激条件下EGR1的表达和功能变化，有助于理解应激响应的分子机制。
三、EGR1抗体的选择与购买
在选择和购买EGR1抗体时，需要注意以下几个方面：
供应商选择：选择信誉良好、产品质量可靠的供应商，如Abcam、Sigma-Aldrich、Thermo Fisher Scientific等。
产品规格：根据实验需求选择合适的抗体规格，如浓度、包装大小等。
价格与货期：不同供应商的价格和货期可能有所不同，需要进行比较和选择。
技术支持：选择提供完善技术支持和售后服务的供应商，以便在使用过程中遇到问题时能够及时得到解决。
四、注意事项
保存条件：EGR1抗体通常需要在-20℃或-80℃下保存，避免反复冻融，以确保其稳定性和活性。
使用前检查：在使用EGR1抗体前，请仔细检查其包装是否完好、有效期是否过期等信息。
实验操作：请按照产品说明书中的步骤进行实验操作，确保实验结果的准确性和可靠性。
应用实例[4][5]
EGR1抗体可以用于Egr1通过肾脏RAS调控糖尿病肾脏疾病进展的作用及机制研究
早期生长反应蛋白1(Early Growth Response Protein 1,Egr1)是DKD进展中重要的转录因子之一。经生物信息学分析发现:RAS系统组分包括AGT,renin,ACE,AT1R启动子上均有Egr1的结合位点。因此,提出以下科学假设:Egr1通过上调RAS系统(AGT,renin,ACE,AT1R)促进DKD进展,敲减Egr1可以全面抑制肾脏RAS系统,延缓DKD进展,可能为DKD提供新的治疗途径。
方法1动物实验(1)第一部分:高脂饮食及链脲佐菌素诱导C57BL/6小鼠建立DM模型,成模12w处死;(2)第二部分:DM小鼠12-16w采用流体力学方法每周尾静脉注射相应质粒,建立Egr1敲减及Egr1过表达DM小鼠模型。2细胞培养人肾近曲小管细胞(HK2)于RPMI-1640培养基(2.0g/L葡萄糖)+10%FBS中培养;小鼠肾小球系膜细胞(SV40 MES 13)及人胚肾293T细胞于含1.0g/L糖的DMEM培养基+5%FBS中培养,培养箱环境为:37℃、5%C02,据细胞生长情况传代、换液、铺板或进行其他实验操作。3细胞转染细胞转染的前一天,以60-80%的细胞密度平均接种于细胞培养板中,以无血清培养基饥饿24小时后,使用lipo3000进行转染,达到基因的过表达或敲减。4实时荧光定量PCR(RT-qPCR)组织及细胞总RNA使用Trizol提取,一步法逆转录RNA为cDNA。使用SYBR试剂进行RT-qPCR反应,以β-actin作为内参,按2-△△Ct方法计算得出目的基因表达量。5 EGR1抗体Western BlotRIPA法裂解并提取组织及细胞总蛋白。每孔蛋白上样量为20-50ug。采用10%的SDS-PAGE胶电泳分离样品蛋白,湿转到PVDF膜(0.45μm)上。然后使用5%脱脂奶粉或BSA封闭,一抗4℃摇床过夜孵育,EGR1抗体二抗室温孵育1h。使用Odyssey近红外成像系统发光显影,采用Gel-Pro analyzer软件分析结果。6肾组织病理学及免疫组化分离并取出肾脏,石蜡包埋后制备3μm组织切片。PAS染色法和Masson染色法用于观察肾组织的纤维化程度;免疫组织化学法用于分析Egr1,RAS及纤维化指标的表达情况。7EGR1抗体染色质免疫共沉淀细胞分为对照组、TGF-β1(2h)及TGF-β1(48h)刺激组,根据ChIP-ITR Express kit(Active Motif,Bedford,MA)试剂盒步骤进行操作,采用抗Egr1抗体或对照IgG来交联蛋白质-DNA,使用RT-qPCR来检测富集效应。使用标准曲线法计算富集倍数。8双荧光素酶报告基因构建ACE荧光素酶质粒(GV238-ACE),将不同浓度梯度Egr1质粒(pENTER-Egr1)和GV238-ACE共转染,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组海肾荧光及萤火虫荧光值。9激光共聚焦肾脏组织切片共染Egr1及AGT抗体,Leica TCS-SL共聚焦显微镜下观察共定位情况。
EGR1抗体结果1 DM小鼠成模后12w,24h尿白蛋白明显升高,肾皮质中Egr1及RAS(AGT,renin,ACE,AT1R)的mRNA及蛋白表达水平均升高。2重组人TGF-β1蛋白干预HK2细胞后Egr1的mRNA及蛋白水平呈一过性瞬时升高,RAS(AGT,renin,ACE,AT1R)的mRNA及蛋白表达水平均升高。随着Egr1浓度(Oug,1ug,2ug,4ug)升高,AGT,renin,ACE,AT1R mRNA及蛋白逐渐升高。敲减Egr1后,AGT,renin,ACE,AT1RmRNA及蛋白随之下调。3 DM小鼠肾皮质激光共聚焦显示Egr1与AGT共定位。4EGR1抗体染色质免疫共沉淀实验证实AGT,renin,ACE,AT1R基因启动子上存在Egr1的结合位点,TGF-β1刺激后AGT,renin,ACE,AT1R富集效率增加。
参考文献
[1]Role of the intrarenal renin–angiotensin system in the progression of renal disease[J].Maki Urushihara;;Shoji Kagami.Pediatric Nephrology,2017(9)
[2]Cerebellar Insulin/IGF-1 signaling in diabetic rats:Effects of exercise training[J].Mariana Eiras Borges;;Alessandra Mussi Ribeiro;;JoséRodrigo Pauli;;Luciana Mendonça Arantes;;Eliete Luciano;;Leandro Pereira de Moura;;JoséAlexandre Curiacos de Almeida Leme;;Alessandra Medeiros;;Natália Oliveira Bertolini;;Clarice Yoshiko Sibuya;;Ricardo JoséGomes.Neuroscience Letters,2017
[3]Klotho down-regulates Egr-1 by inhibiting TGF-β1/Smad3 signaling in high glucose treated human mesangial cells[J].Yang Li;;Fang Hu;;Meng Xue;;Yi-Jie Jia;;Zong-Ji Zheng;;Ling Wang;;Mei-Ping Guan;;Yao-Ming Xue.Biochemical and Biophysical Research Communicatio,2017(2)
[4]Renal Protective Effects of Low Molecular Weight of Inonotus obliquus Polysaccharide(LIOP)on HFD/STZ-Induced Nephropathy in Mice[J].Yen-Jung Chou;;Wei-Chih Kan;;Chieh-Min Chang;;Yi-Jen Peng;;Hsien-Yi Wang;;Wen-Chun Yu;;Yu-Hsuan Cheng;;Yu-Rou Jhang;;Hsia-Wei Liu;;Jiunn-Jye Chuu.International Journal of Molecular Sciences,2016(9)
[5]胡芳.Egr1通过肾脏RAS调控糖尿病肾脏疾病进展的作用及机制研究[D].南方医科大学,2018.