背景[1-3]
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒是一种用于检测小鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等样本中丙二醛(MDA)含量的实验工具。该试剂盒采用酶联免疫吸附法(ELISA)原理，通过特异性抗体与待测样本中的MDA结合，再加入酶标记的二抗，最后通过底物反应产生颜色变化，通过测定吸光度值来定量分析样本中MDA的含量。
该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，适用于大批量样本的检测。同时，该试剂盒还可用于研究MDA在疾病发生和发展中的作用机制，以及评估治疗效果等方面。
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒
一、基本信息
产品名称：小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒
检测原理：采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)，通过抗原抗体反应和酶促显色反应来定量检测样本中的MDA含量。
样本类型：适用于小鼠的血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液、脑脊液、尿液等多种样本类型。
二、产品规格与价格
不同品牌和供应商提供的小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒规格和价格可能有所不同。常见的规格包括48T和96T，价格范围从几百元到数千元不等。具体价格请参考各供应商的实际报价。
三、保存与稳定性
保存条件：通常建议在2-8℃条件下冷藏保存，避免阳光直射和反复冻融。长时间不使用时，可置于-20℃或更低温度下保存。
稳定性：在规定的保存条件下，试剂盒的有效期一般为6个月至1年不等。具体有效期请参考试剂盒说明书。
四、操作步骤
实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。
1.加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜,37℃反应60分钟。
3.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
4.每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液）100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5.温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。
6.依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。
应用[4][5]
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒可以用于δ-阿片受体激活后通过Nrf2通路抑制铁死亡发挥抗帕金森病作用的研究
6-阿片受体激活后通过上调Nrf2抑制MPTP诱导的C57BL/6小鼠多巴胺能神经元中铁死亡的研究目的:虽然目前已知帕金森病的主要病理改变是黑质和纹状体中多巴胺能神经元的丢失,但这种改变的确切机制尚不清楚。有研究表明多巴胺能神经元的丢失可能与铁死亡密切相关
探究激活δ-阿片受体在MPTP诱导的C57BL/6小鼠中的神经保护作用与铁死亡的关联及其潜在机制。
方法:建立MPTP诱导的C57BL/6小鼠模型,设立对照组、MPTP组、MPTP+铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)组、MPTP+DADLE组、MPTP+DADLE+Naltrindole组、MPTP+Naltrindole组。利用行为学实验评估运动症状,免疫荧光法测定黑质及纹状体区酪氨酸羟化酶。利用小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒测定小鼠脑组织中丙二醛(MDA)和4-羟基壬烯醛(4-HNE)水平,评估脂质过氧化情况。利用透射电镜观察线粒体形态变化。采用WB,评估Nrf2、GPX4、SLC7a11等抗铁死亡蛋白的表达水平。
小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒结果:1、行为学实验结果提示,MPTP+F errostatin-1处理小鼠的运动距离(t=32.52,P<0.01)和平均速度(t=33.80,P<0.01)显著高于MPTP处理小鼠,且MPTP+F errostatin-1组与MPTP+DADLE组比较运动距离(t=1.19,P=0.26)无统计学意义。免疫荧光结果提示,MPTP+F errostatin-1处理小鼠的黑质区(t=21.44,P<0.01)及纹状体区(t=14.45,P<0.01)的酪氨酸羟化酶阳性细胞数显著高于MPTP处理小鼠。与MPTP+DADLE组比较,MPTP+Ferrostatin-1组的黑质区(t=1.55,P=0.16)及纹状体区(t=0.12,P=0.90)酪氨酸羟化酶阳性细胞数无统计学差异。
2、通过小鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒测定,MPTP组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=25.48,P<0.01)及4-HNE(t=7.67,P<0.01)水平显著高于对照组。与MPTP组小鼠比较,MPTP+DADLE组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=24.19,P<0.01)及4-HNE(t=2.34,P<0.05)水平显著下降,MPTP+DADLE+Naltrindole组与MPTP+DADLE组比较MDA(t=22.70,P<0.01)及4-HNE(t=2.87,P<0.05)水平显著升高。MPTP+F errostatin-1组小鼠的中脑黑质组织内MDA(t=31.15,P<0.01)及4-HNE(t=5.87,P<0.01)水平显著低于MPTP组小鼠。与MPTP+DADLE组比较,MPTP+F errostatin-1组的中脑黑质组织内MDA(t=2.01,P=0.07)及4-HNE(t=2.51,P=0.06)水平无统计学差异。3、通过TEM检测了小鼠中脑黑质组织中神经元细胞内超微结构的改变,对照组正常形态的线粒体,线粒体脊和线粒体外膜完整。MPTP组的线粒体脊消失和线粒体外膜被破坏。MPTP+F errostatin-1处理的小鼠和MPTP+DADLE处理小鼠的中脑黑质神经元细胞内线粒体脊未见消失和线粒体外膜未被破坏,神经元细胞内线粒体形态完整。
参考文献
[1]Kinases control of regulated cell death revealing druggable targets for Parkinson’s disease[J].Mansour Heba M.;Fathi Ahmed M.;El-Khatib Aiman S.;Khattab Mahmoud.M..Ageing Research Reviews,2023
[2]Neurochemical,histological and behavioral profiling of the acute,sub-acute and chronic MPTP mouse model of Parkinson's disease.[J].Santoro Matteo;Fadda Paola;Klephan Katie J;Hull Claire;Teismann Peter;Platt Bettina;Riedel Gernot.Journal of neurochemistry,2022
[3]Therapeutic Insights on Ferroptosis in Parkinson's disease[J].Thapa Komal;Khan Heena;Kanojia Neha;Singh Thakur Gurjeet;Kaur Amarjot;Kaur Gagandeep.European Journal of Pharmacology,2022
[4]Structural insights of Fe3+inducedα-synuclein fibrillation in Parkinson's disease.[J].Zhao Qinyue;Tao Youqi;Zhao Kun;Ma Yeyang;Xu Qianhui;Liu Cong;Zhang Shengnan;Li Dan.Journal of molecular biology,2022
[5]蔡奔驰.δ-阿片受体激活后通过Nrf2通路抑制铁死亡发挥抗帕金森病作用的研究[D].海南医学院,2023.