背景及概述[1]
人胚肾细胞为293细胞插入SV40T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生株,可以表达SV40T和EBNA1。
复苏方法[1]
293/人胚肾细胞复苏方法为:
1)把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2)把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。
3)把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。
4)标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。5)3天换一次培养基。
相关研究[1]
有实验研究地高辛衍生物对293/人胚肾细胞上延迟整流钾电流(delayedafterpotassiumcurrent,IK)的影响。应用磷酸钙瞬时转染的方法,将人心肌细胞上的延迟整流钾电流通道蛋白基因(humanEther-a-go-goRelatedGene,HERG)转染进人胚肾细胞,全细胞膜片钳技术记录药物浓度分别为1、10、100nmol·L-1的地高辛甲、乙两种衍生物对人胚肾细胞上HERG钾通道时间依赖性电流(Istep)和尾电流(Itail)的影响。
结果显示地高辛衍生物甲和地高辛类似,对HERG钾通道时间依赖性电流和尾电流均呈现剂量依赖性抑制,其半数抑制浓度IC50分别为20.61、22.69nmol·L-1;未见地高辛衍生物乙对HERG钾通道延迟整流钾电流的抑制作用。结论地高辛衍生物甲对转染HERG钾通道的人胚肾细胞的延迟整流钾电流呈浓度依赖性抑制;而地高辛衍生物乙对转染HERG钾通道的人胚肾细胞的延迟整流钾电流无抑制作用。
主要参考资料
[1] 地高辛衍生物对人胚肾细胞293 延迟整流钾电流的作用