背景[1-3]
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的抗原会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗体与结合在包被抗体上的抗原结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，抗原浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中指标的浓度。
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持
2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒操作步骤：
1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品
孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触
及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外。
4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟。
5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
应用[4][5]
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒可以用于血清肠三叶因子（TFF3）在非小细胞肺癌的诊断及化疗疗效评估中的意义
探讨肠三叶因子(Trefoil Factor 3,TFF3)在非小细胞肺癌(Non-Small Cell Lung Cancer,NSCLC)患者的诊断及化疗疗效评估中的作用,为诊断和治疗非小细胞肺癌提供新的肿瘤标志物。
方法:选取2020年06月20日至2021年06月06日于安徽医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科初次确诊的84例非小细胞肺癌患者[肺鳞癌(LUSC)38例,肺腺癌(LUAD)46例]作为非小细胞肺癌组,同一时期在本医院进行体检的21例健康者为对照组,跟踪仅接受培美曲塞(LUAD)或紫杉醇(LUSC)+铂类方案连续化疗2个周期的非小细胞肺癌患者作为化疗组。使用猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒检测非小细胞肺癌患者初次确诊时、连续化疗2个周期后、健康对照组体检第一天血清TFF3水平。采集非小细胞肺癌患者初次确诊时外周静脉血实验室指标(中性粒细胞计数、血小板计数、淋巴细胞计数)、神经元烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段21-1(CYFRA21-1)。下载肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库中的肺鳞癌、肺腺癌数据,分析TFF3表达水平与化疗疗效的关系。
猪肠三叶因子(ITF)ELISA试剂盒结果:1.在非小细胞肺癌组中,肺腺癌和肺鳞癌患者化疗前血清TFF3的表达水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.在血小板计数≥中位数的非小细胞肺癌患者血清中,TFF3的水平高于血小板计数<中位数组的非小细胞肺癌患者(P<0.05)。3.血清TFF3水平诊断非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.73[95%CI(0.62,0.83)],0.69[95%CI(0.56,0.82)],0.77[95%CI(0.66,0.89)],约登指数分别为0.45,0.37和0.55,截断值分别为1109.37pg/ml,1109.37pg/ml和1110.61pg/ml。4.在接受化疗的非小细胞肺癌患者中,化疗后血清TFF3水平显著低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05)。亚组分析显示:肺腺癌患者化疗后血清TFF3水平显著低于化疗前,差异有统计学意义(P<0.05),而肺鳞癌患者化疗前后血清TFF3水平无明显变化。5.通过分析TCGA数据库中非小细胞肺癌患者组织中TFF3水平与化疗效果之间的关系,发现对化疗效果敏感的肺腺癌患者具有更高的TFF3表达水平(P<0.05),而肺鳞癌患者化疗效果与TFF3的表达水平之间未发现明显关系(P>0.05)。
参考文献
[1]Trefoil factor 3 silencing can inhibit the proliferation and apoptosis of lung cancer cells.[J].Liu Moran;Xiao Yin.Journal of B.U.ON.:official journal of the Balkan Union of Oncology.2021
[2]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries[J].Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians.2021
[3]A Review of Chemotherapy and Photodynamic Therapy for Lung Cancer Treatment[J].Ahmed El-Hussein;Patience Mthunzi-Kufa;Saturnin Ombinda-Lemboumba;Sello L.Manoto;Ziya A.Alrowaili.Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry.2021
[4]Identification and validation of hypoxia-derived gene signatures to predict clinical outcomes and therapeutic responses in stage I lung adenocarcinoma patients.[J].Shi Run;Bao Xuanwen;Unger Kristian;Sun Jing;Lu Shun;Manapov Farkhad;Wang Xuanbin;Belka Claus;Li Minglun.Theranostics.2021
[5]常远敏.血清肠三叶因子（TFF3）在非小细胞肺癌的诊断及化疗疗效评估中的意义[D].安徽医科大学,2022.