背景及概述[1]
缓冲液是含有弱酸及其盐的混合物的一种溶液。它能抗酸碱度的少量变化，因此能提供酶反应的有利环境。但各种酶反应所需要的缓冲离子种类与浓度以及pH不尽相同，所以每种酶反应有其最适的缓冲液。Hank's液是生物学实验中最常用的平衡盐溶液（HanksBalancedSaltSolution，HBSS），主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、以及配制其他试剂等。
D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's可用于配制胰蛋白酶消化液(钙镁离子可抑制胰蛋白酶活性)。缓冲液中酚红起pH指示作用。D-Hanks缓冲液(不含酚红)又叫D-Hanks缓冲液（HBSS），不含酚红，不含钙镁，pH7.2-7.4，15-30℃保存。
D-Hanks缓冲液(不含酚红)使用步骤：(一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1NNaOH和1NHCl调节pH值到适宜范围内。（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用D-Hanks缓冲液纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。
一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到彻底灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。
而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。使用D-Hanks缓冲液(不含酚红)时需注意以下事项：1.使用前必须检查D-Hanks缓冲液培养基，若培养基有被污染迹象或超过有效期不得使用。2.采集的标本必须尽快接种培养，以保证结果准确。3.培养基仅用于外部诊断。4.培养后须做灭菌处理。
主要参考资料
[1] 协和医学词典