明胶包被培养器皿的使用方法

2020/10/18 17:56:53

背景及概述[1]

培养器皿又称彼得立皿或陪替氏皿。由科赫的学生Petri发明,故名。一种圆形、浅层、平底、垂直边、有盖的玻璃或塑料皿,形状有大有小,但以直径9cm者最为常用。皿盖与皿底的外形几乎完全相同,惟直径稍大而已。有时为避免玻璃皿盖上的冷凝水滴下而影响正常培养(如测定抗生素效价),也有改用素烧瓷圆板做皿盖的。培养皿是微生物学实验室中最常用的固体培养(平板培养)器皿。明胶是由胶原水解后得到的水溶性蛋白多聚体。明胶包被培养器皿能促进多种细胞的贴壁和生长,可用于培养正常或转染细胞,如血管内皮细胞、心肌细胞、胚胎干细胞、胰岛细胞等,明胶包被培养器皿具有以下特点:① 能促进多种细胞的贴壁;② 预包被的明胶层节省实验准备的时间和费用;③ 批次间的稳定性保证实验结果的可重复性。

使用方法[1]

明胶包被培养器皿使用方法如下:

1.配置0.1%的明胶溶液:

1)准确称量0.1g的明胶,溶于mp(过热蒸汽)的三蒸水中,放进56℃的水浴箱中进行充分溶解;

2)使用0.22um的滤器对明胶溶液进行过滤除菌。过滤的作用,一来是可以除菌,二来是除去溶液中没有溶解的颗粒,这样接下来的铺板才能更加均匀。

3)除菌完毕后,将明胶溶液放在培养瓶中用封口膜封好,无菌存储备用。

2.包被培养皿:

1)取消毒过的干净培养皿,加入适量的0.1%的明胶,以没过整个底面之后再稍微加一点为宜。这个过程不能产生气泡,不然就会导致明胶铺的不均匀,甚至有些地方没有铺上,这样不利于细胞的贴壁;

2)加入明胶之后,将培养皿放置在超净台内30分钟,或者放置在37℃饱和湿度培养箱里20分钟;

3)吸干净明胶后,可直接使用,或在饱和湿度的培养箱中放30分钟,效果更佳。

主要参考资料

[1] 微生物学词典

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