猪降钙素制造 样品处理、分离 将猪甲状腺绞碎,丙酮脱脂成甲状腺粉,加0.1 mol/L盐酸1540 L,60℃搅拌1h,加水1620 L,搅拌1h,离心,沉淀用水洗,合并上清液和洗液再搅拌2h离心。在上清液中加入15L(异戊醇):(乙酸):(水)=20:32:48(体积比)的混合液搅匀,在50℃时,用硅藻土助滤。 猪甲状腺[丙酮]→甲状腺粉[HCl, 水]→[60℃]上清液[异戊醇,HAc]→[50℃]沉淀 离心、过柱、无菌灌封 将沉淀溶于0.3mol/L氯化钠8L,用HCl调 pH 2.5,离心,将滤液用10倍水稀释,过柱,柱用0.02 mol/L乙酸缓冲液平衡,收集含有降钙素的溶液,冻干即得粉末。无菌灌封得成品。 沉淀[NaCl,HCl]→[pH2.5]离心液[CM-Cellulose柱]→[60℃]溶液[冻干]→成品 鳗降钙素制造 将3kg鳗心脏或心包膜,用丙酮(含0.6g EDTA)于5℃浸泡5h,脱水后在15L氯仿中于5℃浸泡5h,再用丙酮浸泡三次,自然干燥得干物质。 鳗心脏或心包膜[丙酮,氯仿]→[5℃; 5h]干物质 将干物质用正丁醇(7.5%)、乙酸(15%)、水在50℃提取24 h,提取液加冷丙酮,沉淀析出。过夜,加0.1 mol/L盐酸溶解,经SephadexG-25、Sp-SephadexG-25过滤。滤液用Amicon UM-2滤膜过滤,浓缩,再经SephadexG-50、CMC、SephadexG-50柱层析,即得成品。 干物质[正丁醇、乙酸、水]→[50℃提取24h]提取液[冷丙酮]→沉淀[盐酸、柱层析]→鳗降钙素 |