福林酚试剂
福林酚试剂 性质
福林酚(Folin-酚)试剂可用于测 定蛋白质含量 ,已有许多采用这一试剂的改良分析操作 进行血清 、抗原-抗体沉淀物 和胰岛素 中蛋白质含量 测定的报道。 虽然这一试剂以其灵敏度高和操作简便得到推荐,但 并不适合普遍的生物化学应用。 尽管这一试剂对某些应用有相当的优势,但在全面开 发之前需掌握它的特性和局限性,已研究了pH、反应时间 及反应物浓度、处理蛋白质常用试剂的允许水平和干扰物 质等变化的影响。
folin-酚试剂一般原理:folin试剂中的磷钼酸-磷钨酸盐被蛋白质中的色氨酸和酪氨酸残基还原,发生显色反应:产生蓝色(钨兰+钼兰)。蓝色的浓重度与蛋白质含量成正比。
福林酚 (Lowry) 法系依据蛋白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合形成蛋白质-铜复合物, 此复合物使酚试剂的磷钼酸还原, 产生蓝色化合物, 同时在碱性条件下酚试剂易被蛋白质中的酪氨酸、酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸还原呈蓝色反应。在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比, 以蛋白质对照品溶液作标准曲线, 采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。该法灵敏度高, 测定范围通常可达20~250μg。
其中福林试剂是该检测方法中最关键的试剂。福林试剂的制备在中国药典2015年版四部中有收载, 目前也有市售产品。实验室自制福林试剂步骤繁琐, 过程复杂, 制备所得的试剂质量无法保证。而福林试剂的其中福林试剂是该检测方法中最关键的试剂。而福林试剂的市售品较容易获得, 故在检测领域广泛使用市售品。