D283 Med
D283 Med 性质
D283 Med细胞是由Friedman等人于1985年建系,源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。
取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;吸弃上清,得到D283 Med细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到T25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5%CO2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好)。
1)按照D283 Med细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;
2)用预冷的1ml冻存液(90%完全培养基+10%DMSO)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。
3)放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。