人微血管内皮细胞株

人微血管内皮细胞株是从人包皮中分离的微血管内皮细胞用pSVT载体转染，PSvt载体是一种基于pBR-322的质粒，含有猿猴病毒40A基因产物大T抗原的编码区。CRL-3243，HMEC-1，已被很好地表征，并显示保留了内皮细胞的许多特征。这些永生化细胞，因为它们是人类微血管内皮细胞的持续可再生来源，可以在许多研究中用作原代人皮肤内皮细胞的替代物。

1）配制完全培养基：基础培养基+胎牛血清+双抗（特殊培养基特殊配置）；

2）细胞复苏：取5ml完全培养基于15ml离心管中，37℃水浴锅预热，从液氮管（或者-80度冰箱）中快速取出冻存的细胞，放入37℃水浴锅中，摇晃使快速化冻（1min左右），然后将化冻的细胞和预热的培养基，移入超净工作台中，化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）吸弃上清，得到细胞沉淀，用2ml完全培养基轻轻重悬细胞，加入到T25培养瓶中，做好标记，放入37℃，5%CO2饱和适度培养箱中培养（培养皿复苏效果更好）；

4）24h后，观察细胞贴壁情况（未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞），吸弃旧培养基，加入新鲜的预热（室温或37℃）的完全培养基，继续培养。

人微血管内皮细胞株可以用于促甲状腺激素抑制人微血管内皮细胞一氧化氮合酶的机制研究。