胞浆蛋白提取试剂盒
中文名称 | 胞浆蛋白提取试剂盒 |
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中文同义词 | 胞浆蛋白提取试剂盒 |
英文名称 | Cytoplasmic protein extraction kit |
英文同义词 | |
CAS号 | |
分子式 | |
分子量 | 0 |
EINECS号 | |
相关类别 | 细胞生物学-蛋白提取/检测 |
Mol文件 | Mol File |
结构式 |
胞浆蛋白提取试剂盒 性质
胞浆蛋白提取试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取胞质蛋白,试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,作用较为温和,可获得蛋白,可用于免疫印迹实验等基础研究实验,由于含有上述的酶抑制剂,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。
1、组织总蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀,放置在冰上备用;称取0.1g的新鲜组织,放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处,用眼科剪将组织块尽可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至没有明显的组织块,这个过程注意冰上操作;将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g离心30min;吸取上清至新的管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
2、细胞总蛋白的提取
裂解液的用量:107个细胞需要裂解液1ml;
贴壁细胞:弃去培养基,用冷的PBS洗两次,弃去PBS,然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞,将刮离的细胞裂解液移入EP管中,颠倒裂解20-30min
悬浮细胞:4 oC 400g离心收集细胞,用冷的PBS洗两次细胞,同样按细胞数加入裂解液,涡旋10s,放置冰上裂解10min,重复3-4次;裂解完毕之后,将细胞裂解液4 oC 12000g离心30min;将上清移入新的EP管中;进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。