基因敲除小鼠

基因敲除技术，又名基因打靶，自20世纪80年代发展起来，主要建立在同源重组的基础上，属于一种新型分子生物学技术。经典的基因敲除技术是指通过同源重组原理将标记基因定点地整合入目标细胞基因组上某一特定的位点，以达到细胞内某一目的基因敲除的一种技术。基因敲除小鼠是利用基因敲除技术敲除某些基因后培养出的小鼠模型，常用于临床、科研实验中的动物模型。

基因敲除小鼠是利用基因敲除技术敲除某些基因后培养出的小鼠模型，常用于临床、科研实验中的动物模型。

1、课题设计，订购课题BAC菌；

2、按照课题设计，完成打靶载体设计和构建；

3、将重组载体电转到胚胎干细胞中，用G418筛选转染后的胚胎干细胞，得到阳性克隆；

4、进一步通过PCR和southern blot杂交技术（基因敲除小鼠检测金标准）对上一步得到的阳性克隆进行筛选，得到稳定整合外源基因的胚胎干细胞阳性克隆；

5、将胚胎干细胞阳性克隆注射到小鼠囊胚中，并植入到假孕小鼠的子宫内；

6、得到嵌合鼠，并获得F1阳性杂合子小鼠。

基于胚胎干细胞的基因打靶技术制备基因敲除小鼠是目前为止唯一一个可以满足几乎所有基因组修饰要求的打靶技术，但目前只应用在小鼠的基因敲除上，而且其周期长工作量大。