ELISA
【概述】
酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）的缩写，一个灵 敏且方便的免疫学测定方法。用来测定生物样品中蛋白质或其他(潜在)抗原物 质的浓度。针对待测物的特异抗体被吸附在一个不溶性的载体表面，如聚氯乙 烯板。添加已知量的样品，这样待测物质被抗体结合。清洗载体，针对这一待 测物质的第2个位点添加二抗，这一分子携带了一个酶，它会使下一个试剂出 现颜色变化。颜色变化的强度能被光度计测定，并同待测物质的标准溶液进行 对比。ELISA广泛用于医学、动物疾病的诊断及科研中。 ELISA由于其高度的重现性、灵敏度和较短的分析时间所决定其应用的广泛性 。ELISA原则上用于检测抗原、抗体及半抗原，在实际应用中可作疾病临床诊 断与监察、食品中有害成分残留的测定、与基因工程合并使用等，ELISA的应 用具有广阔的发展前景。
【原理】
ELISA是指以酶作为标记物，以抗原和抗体之间免疫结合反应为基础的固相吸 附测定方法。一个ELISA测定试剂有机组成包括: 1)包被的抗原或抗体的固相 支持物，即聚苯乙烯塑料微孔或试管; 2)酶标记的抗体或抗原 3)酶的反应底 物等。抗原或抗体的固相化与酶标记，并不影响免疫结合活性与标记酶的活性 。整个测定中，抗原与抗体的结合反应在固相支持物上进行，反应结果的判断 ，以酶与其底物作用后的显色或产生荧光或发光反应为标准，显色或产生荧光 或发光的强度，与临床标本中待测物的浓度成正比或反比关系。
ELISA
酶联免疫吸附测定原理图
【应用】
ELISA原则上用于检测抗原、抗体及半抗原，在实际应用中可作疾病临床诊断 与监察、食品中有害成分残留的测定、与基因工程合并使用等，为保障人类健 康发挥着巨大的医学与遗传学作用。
1) 检查抗原和半抗原及抗体方向
ELISA广泛应用于内分泌、血液、肿瘤、传染病、免疫化学等方向的检测。例 如:用于检测雌性激素、胰岛素等，其敏感性与RIA相当;用于检查凝血因子、 红细胞抗原等;用于检查甲胎蛋自，其敏感性已达到与放射免疫试验相当的水 平。ELISA在抗体检测中优势突出，尤其对病毒检测明显优于常规检测方法。 例如对流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒、狂犬病毒和脊髓灰质炎病毒等的检 测。同时用作自身疫病抗体测定以及对过敏的诊断，例如检测过敏原的抗体。 这此与人类关系密切的基础性检测为保障人们的健康与安全提供了便捷有效的 检测方法.
2) 疾病临床诊断与监察
ELISA在疾病临床诊断与监察中贡献突出.乙肝临床诊断工作中，HBsAg检测结 果往往出现假阳性、假阴性，给患者造成误诊以卫生部临床检验中心提供的 HBsAg临界值血清为模板，自制HBsAg的临界值质控血清，并应用于常规条件下 的室内控制，极地降低了假阳性、假阴性的发生。类风湿性关节炎致残率很高 ，早期诊断是防止关节畸形和致残的关键。传统诊断方法不利于早期诊断，利 用微粒子酶免疫化学发光法和ELISA定量检测CCP在临床应用中为早期诊断提供 了可靠依据。应用生物素一链霉亲和素酶联免疫吸附法建立血浆心肌营养素一 1 (CT-1)测定法，并初步应用于冠心病患血浆CT-1水平的检测。该方法简便、 快速、特异性、敏感性、重复性均为临床检测可接受范围，同标准曲线线性良 好，适用于基础研究与临床检验。
3) 食品中有害成分残留的测定
运用竞争法ELISA进行“瘦肉精”的尿样检测，有效地保证了农产品质量安全 。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法对rh-GH产品中的ECP残留进行检测，并按照 中国药典、生物制品规程及ICH有关要求进行方法学验证，为人们的食品健康 与安全的检测提供了可靠的检测方法。
4) ELISA与基因工程合并使用
为提高ELISA方法的灵敏度和特异性，随着制备单克降抗体的技术的发展，将 其和ELISA法互相结合，从而对物质分析达到DNA分子结构水平，极大的提高了 分析检测的灵敏性与可靠度。PCR-ELISA技术是PCR技术、探针技术和ELISA技 术三者结合的一项技术，近几年，已被应用在检测领域，并取得一定的进展. 在农业生产方向，以转Bt抗虫基因的所表达的杀虫品体蛋自为检测目标，建立 了双抗夹心酶联免疫方法检测转基因棉花中表达的BtCrylAc基因型蛋自，为农 业实际生产带来了可观的经济效益。
【参考资料】
[1] [美]海因•罗伯特(Robert Hine) 主编;吕社民 译.世界最新英汉双解细胞 与分子生物学词典.西安：世界图书出版西安公司.2008.第178-179页.
[2]吕伟. ELISA的应用现状[J]. 硅谷,2011,(03):20.
[3]陈松,张震林,张香桂,周宝良. ELISA方法鉴定转Bt基因抗虫棉[J]. 江苏农 业科学,2003,(01):21-23. [4]世界最新英汉双解生物技术与遗传工程词典 The Facts on File Dictionary of Biotechnology and Genetic Engineering