今天希望通过对恩格列净过氧化杂质研究,能为客户对SGLT-2抑制剂-列净类化合物过氧化杂质研究提供帮助。SGLT-2抑制剂中最耀眼的两颗明星就是恩格列净和达格列净。据不完全统计,勃林格殷格翰的恩格列净22年的销售额就突破了82亿美金,阿斯利康的达格列净也在2022年卖出了近44亿美金。SGLT-2抑制剂系列化合物信息,如图1:
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图1:SGLT-2抑制剂系列化合物信息
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恩格列净目前有单方和复方(恩格列净二甲双胍),所以研发仿制的企业很多。根据振强内部数据,仅2023年向我司采购过恩格列净杂质的企业就超过了45家。目前QCS官网上总共收录了恩格列净杂质94个(扫描文末二维码,查看所有杂质列表)。本文将介绍我中心参照《恩格列净片》进口注册标准(标准号JX20150247)对恩格列净过氧化物进行的相关检测研究工作(恩格列净过氧化物结构信息如图2:)。
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图2:恩格列净过氧化物结构信息
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根据《恩格列净片》进口注册标准(标准号JX20150247)中有关物质方法,我中心首先对该过氧化物杂质进行了液相定性定位研究,色谱条件参照标准中的有关物质方法(见图3)
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图3:片剂进口注册标准有关物质方法
参照此方法,我中心对实验室合成的恩格列净过氧化物进行了测试,该过氧化物杂质与恩格列净原料药的混合进样结果见图5,过氧化物杂质单独进样图谱结果见图4:
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图4:恩格列净过氧化物检测色谱图
恩格列净过氧化物与恩格列净混合进样数据如图5:
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图5:恩格列净及其过氧化物混样图谱
以上色谱结果中,恩格列净保留时间7.7分钟,过氧化物杂质保留时间3.6-3.8分钟呈双峰。由于过氧化物杂质是一对非对映异构体混合物(结构式见图6,关键手性以红色标注),进口注册标准条件对该结构有一定的分离效果因而产生双峰。
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图6:产生双峰的手性碳位置图
QCS研发中心使用液质联用色谱(LCMS)对该样品进行了确认。通过方法优化,恩格列净过氧化物杂质样品的双峰结果可以在LCMS中得到复现(图7),通过对两个色谱峰的MS进行对比(图8&图9)验证了该结论。
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图7:过氧化物双峰的LC-MS图谱
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图8:过氧化物LC-MS图谱中RT=38.272min色谱峰(左)和RT=40.275min色谱峰(右)的MS结果(模式:正离子)
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图9:过氧化物LC-MS图谱中RT=38.272min色谱峰(左)和RT=40.275min色谱峰(右)的MS结果(模式:负离子)
从LC-MS检测数据可以看到,恩格列净过氧化物所出的两个色谱峰在正离子模式下都出了[M+K]+的分子量,在负离子模式下都出了[M+HCOO]-的分子量,而且在正离子和负离子的模式下,两个色谱峰所处的分子量都是一样的。
此外,我研究中心对该样品进行了核磁共振波谱测试和二级质谱检测,该样品核磁波谱结果可以观测到产品结构信号;二级质谱结果中可见明确的次级离子碎裂结构,以上信息均符合产品结构。从核磁氢谱数据也能看到该产品存在两套峰,从侧面证明了该产品是一对非对应异构体化合物存在,如图10:
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图10:恩格列净过氧化物HNMR图谱和二级质谱结果
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除了以上工作外,我中心还根据《恩格列净片》进口注册标准(标准号JX20150247)中有关物质方法对恩格列净过氧化物(RM-E131628)进行了溶液稳定性检测,分别在配样后0、1、2、4、8、12、24小时下进样检测,样品放置在室温下,未避光,检测数据总结如下:
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图11:恩格列净API(RM-E131600)及恩格列净过氧化物(RM-E131628)溶液稳定性数据汇总
从图11中可以看出,在室温(未避光)的条件下恩格列净过氧化物(RM-E131628)溶液相对稳定。可以看到在配样后不同时间点对恩格列净过氧化物和内标物(恩格列净API)的混合样品进行监控,结果显示该杂质稳定性良好,不同时间点内恩格列净过氧化物峰1、峰2保留时间和峰面积无显著变化(RSD值均小于2.0%)。说明在室温、未避光,样品溶液pH值为中性的条件下,恩格列净过氧化物的样品溶液是稳定的。
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另外,我中心除了对恩格列净过氧化物(RM-E131628)做了HNMR、CNMR、DEPT、COSY、HSQC、HMBC和NOESY的全套核磁共振测试并提供相关图谱解析。若客户有意购买本公司恩格列净过氧化物(RM-E131628)产品,本公司将会与客户分享CNMR、DEPT、COSY、HSQC、HMBC和NOESY图谱及图谱解析的内容。如果您有采购意向,请联系小编吧。
除恩格列净过氧化物杂质产品外,我中心已经完成了对恩格列净过氧化物和达格列净过氧化物的研究。以上产品均使用相关注册标准方法进行了验证,如有需要也请联系小编吧。
我中心目前已经完成了对以下四个SGLT-2抑制剂-列净类化合物过氧化物的合成工作,卡格列净和艾托格列净过氧化物目前处于检测信息收集阶段,欢迎咨询。
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图12:SGLT-2抑制剂过氧化物结构式信息
恩格列净过氧化物杂质是我中心已经非常成熟的产品,但是之前接到某客户反馈在msms条件下与别的供应商的数据有冲突,所以我中心也同步的检测了msms数据,并结合我们的核磁二维数据做了同步分析,大家可以放心使用。对此有疑问或者需求的客户可以联系我们。
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