晶体学样品支撑将是一个下一代晶体装样系统,它改变了为X射线衍射数据收集准备晶体的方式。
艾美捷MiTeGen-晶体学样品支撑系统允许用户:
装样单个晶体或成千上万的微晶体
为序列晶体学或单晶XRD优化
用于低温或室温衍射
工作原理——晶体利用湿润的样品装样盒装到支撑上。高湿度的盒子允许在不使液滴或晶体意外脱水的情况下准备样品。然后支撑可以被快速冷却(用于低温)或密封(用于室温工作)。
该系统有多种应用:
常规晶体学
序列晶体学
原位晶体学
室温晶体学
等等
晶体学样品支持系统是一个集成系统,用于为几种类型的晶体学研究准备样品。该系统集成并改进了之前演示的概念,以提供多功能和高性能的解决方案。
该系统的几个突出特征是:
1样品支撑与现有的家用源和邮寄SR晶体学的基础设施兼容,包括样品处理工具、存储盒/垫、自动装样器和转子阶段。这降低了总体成本并增加了数据收集的机会。
2单一的样品支架平台接受不同尺寸/形状晶体的各种样品支撑膜设计,这些设计有助于实现规则或分散的晶体定位。
3使用标准可见光显微镜和激光扫描非线性激发模式,可以直观地对整个支撑活动区域上的微晶体(小至1-2微米)进行成像——不仅仅是在孔中——这归功于每个孔中非常薄的聚合物窗口、孔之间薄的聚合物壁、容易移除减少晶体对比度的周围液体,以及聚酰亚胺的弱TPEF和零SHG信号。
4由湿度控制的样品装载站和加湿手套箱(SLEEC)提供的一或两级湿度控制,可以消除晶体化液滴和晶体的脱水——这是在室温下加载微晶体进行数据收集时的一个关键问题。保持了晶体的原生长同质性,提高了来自许多晶体的衍射数据的扩展和合并,减少了确定结构所需的晶体数量。
5在湿润环境中,脚踏板调节的吸力可以有效地控制溶液和晶体流动,以实现所需的晶体定位(例如,随机分散或在规则间隔的孔中)。通过使用蒸汽扩散在原位生长晶体,也可以实现在孔上方的定位。
6使用只有微米级厚度和微图案特征的薄聚酰亚胺膜(仅约5-20微米高)实现了晶体位置控制。不需要由厚(130-250微米)基板(例如,硅,聚碳酸酯)定义的孔/壁。在样品支撑的所有位置上,背景X射线散射都很低。可以从支撑上的几乎所有晶体收集衍射数据,而不仅仅是那些位于孔或窗户上方的晶体,提高了晶体使用的效率。X射线可以从宽角度范围入射并通过,而不会碰到支撑框架。大样品支撑旋转消除了由晶体优先取向引起的数据收集问题,并且可以从足够大的单个晶体收集完整的数据集。
7对于室温数据收集,约4微米的聚酯密封膜为在大约1-2小时内的数据收集提供了足够的防护,以防止脱水。对于室温存储和运输,可以在小瓶、Eppendorf管和多孔板中储存带有储液的密封样品。
8晶体的冷冻保护被简化并变得更加有效。可以在样品支撑上的晶体上放置含有冷冻保护剂的溶液(或油),然后通过支撑的孔进行吸力撤回;重复这个沉积和移除两次或更多次,可以有效地去除最初存在于晶体表面上的所有溶剂,消除了冷冻晶体学中冰衍射的主要来源(Parkhurst等人,2017年;Moreau等人,2020年),并最小化了过量冷冻保护剂引起的背景散射。
9对于低温温度数据收集,样品可以直接浸入液氮中,并以与冷冻晶体学中的标准环相同的方式和使用相同的工具进行存储、运输和处理。支撑的聚酰亚胺膜比标准的约25微米厚的冷冻电镜网格薄得多,并且每单位面积的热质量也小得多。如果使用约1-2微米的晶体并仔细移除多余的溶液,使用当前最先进的基于液氮的冷却方法,应该能够实现超过50,000 K/s的冷却速率(Kriminski等人,2003年;Warkentin等人,2006年),在典型的冷冻电镜实践中实现的冷却速率(>250,000 K/s)的约10倍之内。因此,使用蛋白质微晶体的室温生物分子构象的热淬灭捕获几乎和使用冷冻电镜网格上的蛋白质溶液一样有效(Kaledhonkar等人,2019年)。
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