Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒旨在定量测定血清中的17-OHP。仅供研究使用。不用于诊断程序。
艾美捷Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒（PG338S）检测原理：
Calbiotech 17α-OH孕酮（17-OHP）是基于测试样本中的17-OHP与17-OHP-HRP之间的竞争性结合原理，以获得恒定量的兔抗17-OHP抗体。在试验中，山羊抗兔IgG包被的孔与25µl 17-OHP标准品、50µl 17-OH HRP偶联物和50µl兔抗17-OHP一起孵育。HRP标记的17-OHP在标准品和样品中与17-OHP竞争特定抗17-OHP抗体的固定数量的结合位点。因此，随着样本中17-OHP浓度的增加，与孔免疫结合的17-OHP过氧化物酶偶联物的量逐渐减少。然后通过洗涤步骤去除未结合的17-OHP。TMB基板被添加，导致蓝色的发展。加入终止溶液停止显色，在450nm处分光光度法测量吸光度。制备了一条标准曲线，将颜色强度与17-OHP的浓度相关联
Calbiotech-17-羟基孕酮（17-OHP）ELISA试剂盒测定程序：
1. 将所需数量的包被条放入支架中。
2. 向相应的孔中分发25微升17-OHP标准品、对照品和样本。
3. 向所有孔中加入50微升工作稀释N-17-OHP酶结合物。
4. 向所有孔中加入50微升N-17-OHP抗体试剂。
5. 轻轻摇动微孔板20-30秒以混合。
6. 在室温下孵育60分钟。
7. 迅速摇动以清除孔中的内容物。用1X洗涤缓冲液洗孔3次。在吸水纸上猛击孔以去除残留的水滴。
8. 向每个孔中加入100微升TMB底物。
9. 覆盖微孔板，并在室温下孵育15分钟。
10. 向每个孔中加入50微升终止溶液，并轻轻混合，直到每个孔中获得均匀的颜色。
11. 在加入终止溶液后的15分钟内，读取每个孔的吸光度，波长为450nm。
结果计算：
标准曲线的构建如下：
1. 计算每组标准品和患者样本的平均吸光度值。
2. 为了构建标准曲线，将每个17-OHP标准品的平均吸光度（垂直轴）与其浓度（ng/ml，水平轴）作图。
3. 通过已绘制的点绘制最佳拟合曲线。
4. 从曲线上读取每个未知样本的吸光度，以确定17-OHP的相应浓度。
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