在生物学和医学研究领域，免疫检测技术是不可或缺的工具，其中二抗（Secondary Antibody）扮演着重要角色。今天我们来看下HRP二抗的基本概念，以及二抗还可以偶联哪些基团。
一、HRP二抗是什么？
HRP二抗，全称为辣根过氧化物酶（Horseradish Peroxidase）标记的二抗。这里的“HRP”是指辣根过氧化物酶，它是一种广泛应用的酶标记物，能够在多种免疫检测中催化底物产生可检测的信号。在Western Blot、ELISA（酶联免疫吸附试验）和IHC（免疫组织化学）等实验中，二抗金标准Jackson的HRP二抗常用于检测目标蛋白或抗体。
具体来说，HRP二抗能够与一抗（Primary Antibody）结合，一抗则特异性地识别目标蛋白或抗原。当一抗与目标蛋白结合后，HRP二抗通过与一抗的Fc段结合，形成一抗-二抗复合物。在加入适当的底物后，HRP能够催化底物产生化学发光、颜色变化或沉淀等信号，从而实现对目标蛋白或抗原的检测。
HRP在不同实验中对应的底物及检测原理和方法
WB
Luminol和H2O2
鲁米诺在碱性条件下与过氧化氢（H2O2）反应，在辣根过氧化物酶（HRP）的催化下产生化学发光信号，可用CCD凝胶成像仪进行检测。
Elisa
TMB
在HRP的作用下，TMB被氧化并产生蓝色产物，随后在强酸条件下变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下进行检测。
HIC
DAB
DAB常用于组织化学和免疫组化实验，与HRP反应后形成不溶性棕色沉淀物，可以使用光学显微镜检测。
二、二抗还可以偶联什么基团？
除了HRP之外，二抗还可以偶联多种不同的基团，以满足不同实验的需求。这些基团主要包括酶、荧光基团、金颗粒和生物素等。
1、酶：除了HRP之外，碱性磷酸酶（AP）也是常用的酶标记物。AP能够在碱性条件下催化底物产生荧光或颜色变化，适用于不同的实验条件。
2、荧光基团：荧光基团如FITC（异硫氰酸荧光素）、PE（藻红蛋白）等，能够发出强烈的荧光信号，适用于细胞或组织标记实验（如组织免疫荧光、细胞免疫化学、流式细胞术等）。这些荧光基团标记的二抗可以在荧光显微镜下直接观察目标蛋白或抗原在细胞或组织中的分布。
3、金颗粒：金颗粒标记的二抗常用于免疫电镜实验。通过金颗粒的高电子密度，可以在电镜下清晰地观察到目标蛋白或抗原的位置和分布。
4、生物素：生物素标记的二抗可以与其他生物素相关的检测系统（如亲和素-生物素系统）结合使用，实现高灵敏度的检测。
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ELISA：1:5,000 - 1:100,000
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