THP-1分化成巨噬细胞诱导攻略

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THP-1分化成巨噬细胞诱导攻略

发布日期:2025/1/3 16:41:35发布人：上海优宁维生物科技股份有限公司

概述

巨噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，在保护机体免受感染和维持组织平衡方面发挥着关键作用。为了研究巨噬细胞的功能和机制，科学家们创造了一种不需要从患者或动物采集组织的模型，即THP-1细胞。THP-1 细胞系最初来自一位急性单核细胞白血病患者的血液，属于悬浮细胞，有分化为多种巨噬细胞的能力，成为巨噬细胞分化的不二之选。THP-1细胞可通过化学物质处理、细胞因子刺激或共培养等方法，诱导其分化为具有巨噬细胞特性的细胞群。

机理

细胞因子刺激是一种常见的THP-1细胞诱导分化方法。IL-4和IL-13等细胞因子能够促使THP-1细胞分化为巨噬细胞，并启动特定的信号通路，进而调控细胞功能。这种方法可以模拟体内的免疫调节过程，并提供一种便捷的方式来研究巨噬细胞在炎症反应、免疫调节和抗肿瘤等方面的功能。
巨噬细胞被分为两种主要类型：M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞。THP-1细胞通常用佛波酯（PMA）（abs9107）诱导分化为巨噬细胞，然后在PMA仍然存在的情况下：
加入脂多糖(LPS)(诱导浓度：100ng/mL)( abs47014848)、IFN-γ(诱导浓度：20ng/mL)（abs04123）培养48h，诱导其向M1极化；
加入IL-4(诱导浓度：20ng/mL)（abs04698）、IL-13(诱导浓度：20ng/mL)（abs04079）培养48h，诱导其向M2极化；
最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。

诱导步骤

THP-1诱导分化成巨噬细胞实验步骤：
（1） THP-1细胞的培养：更多培养技巧可查看THP-1细胞培养攻略

THP-1（人单核细胞白血病细胞）细胞基本信息

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形态

淋巴细胞样

生长特性

悬浮

营养体系

89% RPMI1640基础培养基(abs9484)+10%胎牛血清优级(abs972)+1%双抗(abs9244)+0.1%β-巯基乙醇溶液(abs9592)

THP-1（人单核细胞白血病细胞）

（2）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100ng/mL）制成诱导培养基。
（3）接种细胞：收集THP-1细胞并进行计数，用诱导培养基重悬细胞沉淀调整细胞密度为5*10^5/mL，将细胞种入六孔板，每孔加入细胞悬液2mL。
（4）诱导培养：48h后，显微镜下观察巨噬细胞构建成功。
（5）诱导成功的标志：单核细胞THP-1用PMA诱导后，由悬浮式生长变成贴壁生长，由圆形变成不规则形态，体积进一步增大，细胞浆疏松，细胞核增大明显，可见大量明显细胞器，胞膜周围可见少量突起。

PMA诱导THP-1细胞培养的相差显微照片。

用PMA孵育THP-1细胞48 h，显示THP-1 (40X)在(A)诱导前(B)诱导后的形态学变化。它们的形态由圆形变为细长和扁平。

巨噬细胞进一步诱导成M1型实验步骤：
（1）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100ng/mL）、脂多糖(LPS)(诱导浓度：100ng/mL)( abs47014848)、IFN-γ(诱导浓度：20ng/mL)（abs04123），制成诱导培养基。
（2）诱导培养：将已经诱导成的巨噬细胞上清弃除，加入诱导培养基（6孔板，每孔2mL）培养48h，诱导其向M1极化。48h后，显微镜下观察M1细胞是否构建成功。
（3）最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。

巨噬细胞进一步诱导成M2型实验步骤：
（1）诱导培养基的配置：向1640完全培养基（含胎牛血清）里加入PMA（诱导浓度：100ng/mL）、加入IL-4(诱导浓度：20ng/mL)（abs04698）、IL-13(诱导浓度：20ng/mL)（abs04079）制成诱导培养基。
（2）诱导培养：将已经诱导成的巨噬细胞上清弃除，加入诱导培养基（6孔板，每孔2mL）培养48h，诱导其向M2极化。48h后，显微镜下观察M2细胞是否构建成功。
（3）最后，在无刺激物和无PMA的情况下，用无血清RPMI-1640基础培养基重悬细胞，可保持72h。

THP-1极化进入M1和M2巨噬细胞图。