CD19(也称为分化簇19、B淋巴细胞表面抗原B4或CVID3)是在B细胞成熟的大多数阶段在B淋巴细胞表面表达的糖蛋白。它是B细胞终末分化的严格要求。CD19基因的突变会导致与受影响的抗体产生相关的严重免疫缺陷综合征,如CVID3(常见变量免疫缺陷3)。大多数B细胞恶性肿瘤表达正常至高水平的CD19,使其几乎成为癌症免疫疗法的理想靶点。Blinatumomab是一种CD19/CD3双特异性T细胞接合剂(BiTE),已被批准用于复发/难治性B前体ALL(急性淋巴细胞白血病),CD19是首个获批的CAR-T细胞疗法的靶点。CD19功能和表达谱的研究将继续扩大我们的知识,并支持在癌症治疗中更广泛的应用。
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抗CD19 CAR慢病毒是复制能力不强的、基于HIV的VSV-G假型慢病毒颗粒,可以转导大多数哺乳动物细胞,包括原代细胞和非分裂细胞。这些病毒转导与第二代CAR(嵌合抗原受体)连接的抗CD19(克隆FMC63)的ScFv部分,含有CD8铰链、4-1BB和CD3ζ信号结构域(图1)。
图1. (A) 用于产生抗CD19 CAR慢病毒的慢病毒载体示意图。这个载体是一个自我灭活(SIN)载体。没有包含任何哺乳动物选择标记。 (B) 构建图示显示了抗CD19 CAR的组成部分。注意:该产品转导了与其他可获得的抗CD19 CAR慢病毒(BPS Bioscience # 78600, 78602 和 78775)相同的抗CD19 CAR构建(CD19 ScFv-CD8-4-1BB-CD3ζ),但在关键方面有所不同。请见图2。
艾美捷抗CD 19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z; SIN载体)(#BPS-78601)应用:
作为T细胞中抗CD19 CAR评估的阳性对照。
转导优化实验。
产生抗CD19 CAR-T细胞(仅限研究使用,不得用于治疗目的)。
配方:
慢病毒颗粒由HEK293T细胞生产、浓缩,并在DMEM中重新悬浮。根据特殊请求,可以按定制配方包装病毒颗粒,需额外收费。
尺寸和滴度:
每瓶(50 µl)抗CD19 CAR的滴度≥ 3 x 10^8 转导单位(TU)/ml。每批的滴度会有所不同;确切的数值随每次发货提供。
存储:
慢病毒通过干冰运输。长期存储建议将病毒存放在-80°C。避免反复冻融循环。每次冻融循环都可能导致滴度显著下降。
生物安全:
慢病毒是使用第三代自我灭活(SIN)慢病毒载体生产的,确保慢病毒载体在转导和整合到目标细胞的基因组DNA后自我灭活。由于它们来自缺乏包装信号的包装质粒,因此转导细胞中不会表达任何HIV基因(gag、pol、rev)。尽管假型慢病毒是复制能力不足的,但它们需要在生物安全等级2的设施中使用。BPS建议遵循所有地方联邦、州和机构的规定,并采取所有适当的安全预防措施。
未提供的必需材料:
这些材料不随慢病毒提供,但必须按照设计协议使用。BPS Bioscience培养基、试剂和荧光素酶检测系统都经过验证和优化,建议使用这些材料以获得z佳结果。
抗CD 19 CAR慢病毒(CD 19 ScFv-CD 8 -4- 1BB-CD 3 z; SIN载体)相关产品:
Anti-CD19 CAR / NFAT (Luciferase) Reporter Jurkat Cell Line (CD19 SCFV-CD28-4-1BB-CD3ζ)
Anti-CD19 CAR-T Cells
Firefly Luciferase CD19 Knockout Raji Cell Line
CD19 Knockout Raji Cell Line
Firefly Luciferase CD19 Knockout NALM6 Cell Line
ONE-Step™ Luciferase Assay System
https://www.amyjet.com/products/BPS-78601.shtml