S91 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

"S91 Cells(赠送Str鉴定报告)|小鼠黑色素瘤细胞

细胞背景资料：黑色素瘤；雄性；DBA

细胞形态：上皮细胞样

体内细胞培养及其操作步骤：【瘤细胞悬液接种】１)无菌选取生长良HAO(有光泽，淡红色)瘤组织或对数生长期培养瘤细胞；２)在PBS中将瘤组织剪碎后用匀浆器研磨，经８０～１００目筛网过滤成细胞悬液；３)培养细胞应用PBS洗两遍；４)计数并调整细胞浓度至１０７～１０８／ml；５)常规消毒后，于接种部位(通常为背部或腋窝腹股沟皮下)用医用注射器皮下潜行一段后注入细胞悬液(０.１ml／部位，＞１０６细胞)。初次接种成功率低，细胞数尽可能多一些；６)次日注意观察动物一般情况。初次接种一般有一段较长的潜伏期，以后随着传代潜伏期逐渐缩短，Zui后固定为一个相对稳定的时间。【腹水瘤的建立与腹水瘤的接种】将实体瘤细胞直接种于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤细胞，将这种腹水反复传代，即可成为腹水瘤。初次传代时，腹水常呈血性(含大量红细胞)，反复传代后腹水逐渐变成乳白色。腹水瘤的接种过程如下。１)将冻存或培养的腹水瘤细胞离心和洗涤，进行细胞计数；２)消毒动物，左下腹穿刺接种１０６腹水瘤细胞；３)接种腹水瘤细胞后约７~１２d，待小鼠腹部明显膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用９号针头抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽３~５ml；４)抽取的腹水经３０００rpm离心１５min，收集上清，分装冻存备用。

细胞生长：贴壁

IPLB-Sf21细胞类似产品：：OV-2008细胞、HNTEC细胞、KYSE-510细胞

RPPVEC细胞类似产品：：H209细胞、HCT FET细胞、UACC893细胞

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Monomac-1细胞类似产品：：H2228细胞、Panc 10.05细胞、SUM190细胞

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细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源

[细胞产品包装]鲜活细胞：T２５培养瓶(一瓶)或冻存细胞：１ml冻存管(两支)

悬浮细胞不容易转染：悬浮细胞是指细胞生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，如淋巴细胞。在实验室经常会遇到悬浮细胞的转染，其和贴壁细胞转染还是有很大不同的。目前大多数实验室用的是脂质体类的转染试剂，脂质体转染是基于电荷吸引原理，先形成脂质体-DNA复合物，散布在细胞周围，然后通过细胞的内吞作用，将目的基因导入细胞内，而脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会比悬浮细胞GAO出很多倍，所以，脂质体转染时悬浮细胞的转染效率要明显低于贴壁细胞。其次，脂质体试剂的毒性较大，这就使得悬浮细胞的转染更为困难了。另外，悬浮细胞不易培养，易死亡，也给细胞转染造成了一定的困难。为了提GAO悬浮细胞的转染效率，可以使用非脂质体的转染试剂，如纳米材料的。也可以使用电转染方法，针对悬浮细胞等难转染细胞还是挺不错的，电击对细胞有一定的损伤，ZuiHAO选用具有细胞膜修复功能的电转染试剂，可以将电击对细胞的伤害降到Zui低，悬浮细胞不易转染，选对试剂及良HAO的细胞培养环境才是关键。

细胞传代方法：１：２-１：３传代；每周换液２-３次。

NL-20细胞类似产品：：RERF-LC-MS细胞、9L细胞、Hs832.Tc细胞

CSQT-2细胞类似产品：：Blotchy fibroblast-11细胞、COR-L88细胞、BT-474细胞

SK-MES细胞类似产品：：624-mel细胞、BBE细胞、MPP 89细胞

DU 145细胞类似产品：：Fetal Human Lens-124细胞、McA-RH 8994细胞、U118-MG细胞

SKNO1细胞类似产品：：MDA-MB-175VII细胞、HCC-1937细胞、CT26细胞

细胞来源说明：来源于RCB、ATCC、KCLB、DSMZ、ECACC、INCell、ScienCell、ECACC、JCRB、Asterand、ICLC等知名细胞库

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细胞生长特性：贴壁

Colo16细胞类似产品：：HBMEC细胞、NCIH520细胞、Wills Eye Research Institute-Retinoblastoma-1细胞

HS-68细胞类似产品：：HCC-1438细胞、CCD-112 CoN细胞、ChaGo-K-1细胞

PIEC细胞类似产品：：SK-SH-SY5Y细胞、GC-1 spg细胞、WiDr-TC细胞

SEM细胞类似产品：：LTEP-a2细胞、OC-3-VGH细胞、WM115细胞

KM12 SM细胞类似产品：：Madin Darby Bovine Kidney细胞、SCH细胞、GAK细胞

Panc05.04细胞类似产品：：HCPEpiC细胞、SW.620细胞、AtT20细胞

常见细胞培养中一些问题总结：１)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为５%-１５%，不要低于５%或GAO过２０%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过GAO则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为１０%，可以适量加减；２)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；３)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；４)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；５)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–８０°C太久；６)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。

细胞复苏相关注意事项：１.取细胞的过程中注意带HAO防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。２.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全无毒副作用，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在１-２min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)ZuiHAO选择进口产品。３.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较GAO，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。４.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不HAO离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。５.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时１ml细胞液要加１０ml-１５ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。６.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏１管细胞一般可分装到１-２只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。７.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于０.５%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是１%。所以如果你的冻存液的浓度是１０%DMSO的话那么加１０ml以上的培养基就恰HAO稀释到了无害浓度。

CMEC/D3细胞类似产品：：DB细胞、GM00215A细胞、FBHE细胞

MIA PaCa-2细胞类似产品：：NCI H82细胞、SP2细胞、DoTc2-4510细胞

293 c18细胞类似产品：：NCI-SNU-668细胞、HPAF-I细胞、A431/P细胞

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RCCJF细胞类似产品：：HSC-1细胞、UMUC1细胞、CLONE M3细胞

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HCC1171细胞类似产品：：Wistar Institute-38细胞、MiaPaCa-2细胞、DSL-6A/C1细胞

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4T1-LUC细胞类似产品：：HEL-92.1.7细胞、BT-325细胞、H650细胞

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JIMT细胞类似产品：：HECV细胞、OCILY19细胞、SUPB15细胞

MDA-MB 231细胞类似产品：：HCT 116细胞、UM-UC-1细胞、HCC1806细胞

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Capan 1细胞类似产品：：CAOV3细胞、BHP 10-3细胞、NCI-SNU-5细胞

H-2170细胞类似产品：：WILL-2细胞、Y-79细胞、RN-c细胞

VMM5A细胞类似产品：：CX-1细胞、Fox/NY细胞、7860细胞

CAL 78细胞类似产品：：SNU-387细胞、U138-MG细胞、MB49细胞

OAW-42细胞类似产品：：SKNDZ细胞、Granta519细胞、NCIH2085细胞

HEP-3B2细胞类似产品：：CNE-2Z细胞、OCLY8细胞、KMM-1细胞

OCILY3细胞类似产品：：Madison细胞、mouse Inner Medullary Collecting Duct-3细胞、HEK AD293细胞

SG231细胞类似产品：：K7M2细胞、32Dc3细胞、MRMT-1细胞

T-HSC细胞类似产品：：SNU-119细胞、Leghorn Male Hepatoma cell line细胞、ROS17/2.8细胞

R D细胞类似产品：：CAL 120细胞、MDA-MB-175VII细胞、SUM 149细胞

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BT 20细胞类似产品：：NCI-HUT-460细胞、NE-4C细胞、NCI-H2122细胞

Human Hepatocyte Line 5细胞类似产品：：COLO206F细胞、NB.4细胞、Huh7.5细胞

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