高纯质粒小提试剂盒
一、产品简介。
本产品是一款从工程菌内大量提取质粒 DNA 的试剂盒,并能够去除蛋白质与 RNA,得到高纯度的质粒 DNA,用于转染和酶切等生物学实验。
二、运输与存储条件。
本试剂盒中的 RNase A 需低温运输,-20 ℃保存,其它组份常温运输与保存,有效期 12 个月。
三、特点与优势。
1. 有效去除蛋白质与 RNA,得到高纯度的质粒 DNA。
2. DNA 纯化柱可结合 20-30 μg 的质粒 DNA。
四、使用说明
1. 试剂配制:
a) Buffer P1 (重悬液) 配制。将 RNase A 全部加入 Buffer P1 中,混匀,4 ℃保存。
b) Buffer W3(漂洗液)配制。溶液中加入 35 mL 无水乙醇,混匀,室温保存。
2. 细菌收集。利用 15 mL 离心管收集 2-5 mL 菌液,12,000×g 离心 2 min,弃上清。将离心管倒立在纸巾上,吸尽残余液体,以免影响后续实验
3. 加入 250 μL Buffer P1(确定加入 RNase A),振荡(vortex)至细菌完全重悬。(若细菌沉淀没有完全重悬,会影响裂解效果,降低质粒 DNA 提取量。)
4. 加入 250 μL Buffer P2(室温较低时,Buffer P2 易沉淀,请在 37 ℃水浴锅中加热 10 min,待沉淀消失后再使用),轻柔地上下翻转 20 次,液体变透明,保证细菌充分裂解。(不要剧烈震荡(vortex),以免 DNA 断裂。裂解时间不宜超过 5 min,以免质粒 DNA 受到破坏。细菌充分裂解后液体变得清亮粘稠。如果仍然浑浊,则细菌过量,裂解不彻底,应加大裂解液用量。)
5. 加入 350 μL Buffer P3,立即温和地上下翻转 20 次,充分混匀,出现白色絮状沉淀。(混匀要充分,以免出现局部沉淀,影响中和效果。)
6. 12,000×g 离心 10-20 分钟,上清转入 DNA 纯化柱中,12,000×g 离心 30 sec,弃滤液。
7. 剩余的上清液加入相应的 DNA 纯化柱, 12,000×g 离心 30 sec,弃滤液。
8. 加入 500 μL Buffer W1(去蛋白液),12,000×g 离心 30 sec,弃滤液。
9. 加入 500 μL Buffer W3(漂洗液),12,000×g 离心 30 sec,弃滤液。
10. 空 DNA 纯化柱,12,000×g 离心 2 min,去除 DNA 纯化柱中残余液体。
11. 将 DNA 纯化柱转移至新离心管中,在柱中央滴加 100 μL Elusion Buffer D(洗脱液)或 ddH2O,室温静置 2 min。
12. 12,000×g离心2 min,收集质粒DNA溶液。
13. 测定浓度,或置于-20 ℃冰箱中保存。
五、注意事项
1. 质粒提取量与细菌浓度及质粒拷贝数等因素有关。低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒提取时应加大细菌使用量。
2. 洗脱体积不应小于30 μL,否则降低DNA产量。
3. 为了您的健康,实验过程中请穿实验服,并佩戴手套与口罩。
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