海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒

海肾萤光素酶报告基因检测试剂盒

一、产品简介。

海肾萤光素酶（Renilla Luciferase）是一种分子量为 36 kD 的蛋白，最初从腔肠动物海肾(Renilla Reniformis)中分离鉴定出来.，在氧气存在的情况下可以将腔肠素（Coelenterazine）氧化成腔肠酰胺（Coelenteramide），并发出生物萤光。检测萤光的强度，即可确定海肾萤光素酶的表达水平。可以将目的基因的转录调控元件或启动子区域 DNA 序列克隆到海肾萤光素酶基因的上游，或将目的基因的 3’-UTR 区域 DNA 序列整合到海肾萤光素酶表达基因的下游，通过测定海肾萤光素酶活性的变化来鉴定目的基因在转录水平的表达变化。此外，海肾萤光素酶通常与萤火虫萤光素酶共同表达在一个细胞内，充作萤火虫萤光素酶活性检测的内参。

二、运输与存储条件。

本产品低温运输，各组份依据保存条件分开保存，有效期 12 个月。

三、特点与优势。

1. 本试剂灵敏度高于市售同类试剂，可以更有效的检测海肾萤光素酶活性。

2. 本试剂盒操作简单，能够快速完成海肾萤光素酶活性检测。

四、使用说明。

1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞为处理对象，实验步骤如下：

2. 细胞转染。细胞转染实验请参考本公司转染试剂（Omifection，Cat：Omc-01）说明书中的实

验步骤，将编码海肾萤光素酶基因的质粒转入 6 孔板的细胞中，2 μg/孔。

3. 细胞裂解液配制。将 5×细胞裂解液与 ddH2O 按照 1:4 的比例混合，配制成 1×细胞裂解液。现用现配，剩余的细胞裂解液可在 4℃保存一周。

4. 细胞裂解。细胞转染 48 h，弃培养液，预冷的 PBS 洗涤细胞 1 次，加入 1 ml 细胞裂解液（1×），置于 4 ℃冰箱中的摇床上，摇晃 15-30 min，裂解细胞。裂解液转入 1.5 ml EP 管中，12,000×g，4 ℃离心 5 min，上清转移至新的 EP 管中，作为待测样品。

5. 海肾萤光素酶检测试剂配制。每个样品需要 100 μl 检测试剂。根据样品数量，计算所需海肾萤光素酶检测试剂体积，按照底物：稀释液=1:50 的比例稀释底物，制备海肾萤光素酶检测试剂。

6. 活性测定。打开检测仪器，设置测定参数，一般延迟时间（整合时间）为 2 sec，测定时间为 10-20 sec。吸取 100 μl 海肾萤光素酶检测试剂，加入 EP 管（或 96 孔板）中，再加入 5-20 μl 待测样品（细胞裂解液），混匀，仪器检测。

五、注意事项

1. 酶促反应受温度影响，待测样品和试剂应达到室温后再进行检测。

2. 海肾萤光素酶的底物腔肠素是乙醇溶液，易挥发。收到产品时若发现其体积小于0.2 ml，可自行添加适当的无水乙醇补齐体积为0.2 ml。

3. 配制的海肾萤光素酶检测试剂，若不立即使用，可置于-20 ℃保存1周， -80 ℃保存一个月。

4. 手动测定时，样品加入底物时的间隔时间和混合次数尽量一致，减少操作误差。

5. 若与萤火虫萤光素酶配套形成双萤光素酶检测系统，请使用具有灭活萤火虫萤光素酶活性的特定海肾萤光素酶底物稀释液（双萤光素酶报告基因检测试剂盒中提供，SFAR稀释液）。