外泌体纯化试剂盒 （磁珠型）
一、产品简介。
本产品是一款以磁珠为分离材料的外泌体纯化试剂盒。在特定的缓冲体系中，磁珠可吸附外泌体，并被特定的洗脱液（或 PBS 与 ddH2O）洗脱下来，从而完成外泌体的分离与纯化。同时，利用PBS 或 ddH2O 洗脱后的外泌体不含其它化合物，可直接用于动物体内注射实验。
二、运输与存储条件。
本产品低温运输，4 ℃保存，有效期 12 个月。
三、特点与优势。
1. 本试剂纯化效率高，外泌体回收率达到 95%以上。
2. 纯化后的外泌体纯度高，蛋白含量在 5%以内。
3. 纯化后的外泌体不含其它化合物，可直接用于动物实验。
4. 本试剂盒操作简单，能够快速（2h）完成外泌体纯化。
四、使用说明。
1. 本产品可用于血清等粘度较大液体中外泌体的纯化，也可用于细胞培养上清等粘度较小液体中外泌体的分离纯化，其纯化体系略有不同。
2. 样品准备。血清或细胞培养液转入离心管，5 000 rpm，4 ℃离心 5 min，上清转移至新的离心管
中，用于外泌体纯化。
3. 磁珠准备。取出试剂盒中的瓶装磁珠，震荡混匀（vortex）30 sec，利用移液器吸取 1 ml 磁珠，加入 50 ml 离心管中，5 000 rpm，4 ℃离心 2 min，弃上清。
4. 磁珠洗涤。加入 10 ml 4 ℃预冷的 PBS（0.2 μm 滤膜过滤），震荡混匀（vortex）30 sec，5 000 rpm，4 ℃离心 5 min，弃上清。
5. 外泌体吸附。根据样品类型，按照下表，配制外泌体纯化体系，置于旋转混合器中，4 ℃旋转混合 60 min。
6. 磁珠收集。将离心管置于磁力架上，4 ℃静置 5-10 min，使磁珠聚集，弃上清。或 5 000 rpm，4 ℃离心 5 min，沉淀磁珠，弃上清。
7. 残余液体去除。将装有磁珠沉淀的离心管转入离心机，5 000 rpm，4 ℃离心 1 min，用移液器吸尽管中残余液体。
8. 洗脱。加入 1.2 ml Buffer EXE（或 PBS 与 ddH2O），用移液器轻轻混合 10 次，转移到 2 ml 离心管中。
9. 收集。8 000 rpm，4 ℃离心 2 min，立即将上清转移至 EP 管中，即为纯化的外泌体溶液。
10. 过滤。利用 PBS（0.2 μm 滤膜过滤）润洗针式过滤器 A 和 B（即过滤 5 ml PBS），并利用针式过滤器 A 过滤外泌体溶液，除去体积较大杂质。
11. 滤液利用针式过滤器 B 再次过滤，除去较小的杂质，得到纯化的外泌体溶液。
12. 纯化的外泌体溶液可立即用于粒径检测（NTA 分析），或保存在-80 ℃。
五、注意事项。
1. 磁珠严禁冻存，否则失效。
2. 用于 NTA 检测的纯化外泌体溶液不可冻存，可暂时置于 4 ℃冰箱中保存（7 天）。
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