质粒DNA转染试剂 Omifection
一、产品简介。
Omifection 是一款非脂质体类真核细胞 DNA 转染试剂,主要用于质粒 DNA 转染,在多种细胞中都具有较高的转染效率和超低的细胞毒性,广泛用于蛋白表达、文库筛选和慢病毒包装等实验。
二、运输与存储。
本产品常温运输,4 ℃保存,严禁冻存。
三、特点与优势。
1. 转染效率高。适用于多种类型细胞的转染实验。
2. 细胞毒性低。Omifection 对多种细胞没有细胞毒性。
3. 操作方便。本产品不受抗生素和血清的影响,转染前细胞不用换液。
四、使用说明。
1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞作为实验体系,细胞转染实验步骤如下:。
2. 细胞培养。胰酶消化法收集细胞,接种到 6 孔板中,24 h 后细胞密度达到 50%-80%。
3. 转染复合体制备。移取 200 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco)加入灭菌的 EP 管(1.5 mL)中,再依次加入 2 μg 质粒(体积依据质粒浓度计算)和 6 μL Omifection 转染试剂,混合 10-20 次,室温静置 15-30 min (30 min 转染效果会更好),形成转染复合体。
4. 细胞转染。将转染复合体加入细胞培养液中,轻摇混匀,转入 CO2培养箱中继续培养。
5. 转染 6-12 h 后换液,48 h 检测外源蛋白表达情况(如荧光显微镜下检测 GFP 荧光)。
五、注意事项。
1. 本产品严禁冻存,否则转染效率降低。
2. 质粒 DNA 与 Omifection 的比例(μg:μL)为 1:3 时能够在大部分细胞中取得转染效果。
3. Omifection 与质粒 DNA 加入 OPTI-MEM 培养液中后,剧烈混合,以便彻底混匀,并需要静置15-30 min,以便形成转染复合体。
4. 转染实验一般在细胞传代 24 h 后进行,保证细胞进入对数生长期,生长状态良好。
5. Omifection 对大部分细胞没有毒性,如果不考虑转染试剂对实验的影响,转染后可以不换液。
六、转染效果检测。
HEK293 细胞接种于 6 孔板,24 h 后利用 Omifection 和 Lipofectamine 2000(LIPO 2000)转染绿色荧光蛋白(GFP)编码质粒,48 h 后荧光显微镜下检测 GFP,并拍照。
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