支链淀粉含量试剂盒说明书
分光光度法 50管/48样
注 意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
支链淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响,对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。
支链淀粉含量试剂盒测定原理:
利用80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶;4℃保存;
试剂二:乙醚50mL×1瓶;4℃保存;(自备)
试剂三:液体50mL×1瓶;4℃保存;
试剂四:液体4mL×1瓶;4℃保存;
试剂五:液体1mL×1瓶;4℃保存;
淀粉提取:
称取0.01~0.02g烘干样本(建议称取约0.01g)于研钵中研碎,加入1mL试剂一,充分匀浆后转移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂二(乙醚)振荡5min,3000g,25℃离心5min,弃上清,留沉淀,加入1mL试剂三充分溶解,90℃水浴10min,冷却后待测。
支链淀粉含量试剂盒测定步骤:
1、 分光光度计预热30min以上,蒸馏水调零。
测定管:在EP管中依次加入100uL样本, 70uL试剂四,600uL蒸馏水,10uL试剂五,220uL蒸馏水,混匀,分别测定550和743nm处吸光值,ΔA测定=A550-A743。
空白管:在EP管中依次加入100uL试剂三,70uL试剂四,600uL蒸馏水,10uL试剂五,220uL蒸馏水,混匀,分别测定550和743nm处吸光值,ΔA空白=A550-A743。
支链淀粉含量计算:
标准条件下测定的回归方程为y=0.1214x+0.0076;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA测定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr
2、按样本干重计算
支链淀粉含量(mg/g干重)= [(ΔA测定-ΔA空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA测定-ΔA
空白-0.0076) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.1mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
最低检测限为10mg/g干重或0.1mg/mgprot。
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