木质素(Lignin)含量试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
木质素(Lignin)含量试剂盒测定意义:
木质素是构成植物细胞壁的成分之一,是由聚合的芳香醇构成的一类物质,存在于木质组织中,主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁。木质素主要位于纤维素纤维之间,起抗压作用。
测定原理:
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在280nm处有特征吸收峰,280nm的吸光值高低与木质素含量正相关。
需自备的仪器和用品:
天平、40目筛,玻璃试管、烧杯、离心机,恒温水浴锅、烘箱、封口膜、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、高氯酸,浓硫酸。
试剂组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体100mL×1瓶,4℃保存。
样品处理:
样品80℃烘干至恒重,粉碎,过40目筛,称取约5mg(记为W)于10mL玻璃试管中(务必用玻璃试管,不可用Ep管)
木质素(Lignin)含量试剂盒测定操作表:
| 空白管 | 测定管 |
样本(mg) |
| 5 |
试剂一(μL) | 1000 | 1000 |
高氯酸(μL) | 40 | 40 |
于10mL玻璃试管中,用封口膜密封,充分混匀,80℃水浴40min,每隔10min震荡一次,然后自然冷却 |
试剂二(μL) | 1000 | 1000 |
充分混匀 |
上清(μL) | 40 | 40 |
试剂三(μL) | 1960(参照注意事项四) | 1960(参照注意事项四) |
取1mL于石英比色皿,测定280nm处吸光值A。分别记为A空白管和A测定管,ΔA=A测定管-A空白管 |
计算公式:
标准曲线:y = 0.0694x+0.0068,R2=0.9889
Lignin(mg/g干重)= (ΔA-0.0068)÷0.0694×V反总×10-3÷W×T=0.0294×(ΔA-0.0068) ÷W×T
V反总:反应总体积:2.04mL;W:样本质量,g;T:稀释倍数
注意事项:
1. 试剂一有毒性,请操作时做好防护措施,加热前必须用封口膜密封,以防气体溢出。
2. 加热过程中有剧烈反应,震荡时轻摇,以免压力过大喷出造成人生伤害。
3. 试剂三具有强刺激性,建议操作过程全部在通风橱子操作。
4. 取上清加试剂三步骤根据自己样品乙酰化程度,试剂三的用量可调整,保证吸光值在0.1-0.8之间即可,并在公式中参与计算。
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