总糖含量试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
注 意 :正式测定前请选择2-3个预期差异较大的样本做预测定
总糖含量试剂盒测定意义:
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖也可称为碳水化合物,包括可溶性的单糖,二糖以及不溶性的淀粉,纤维素,几丁质等。
测定原理:
总糖酸水解为还原糖,在NaOH和丙三醇存在下,DNS试剂与还原糖共热后被还原成氨基化合物,在过量的NaOH碱性溶液中呈桔红色,在540nm处有吸收峰,以此测定样品中的总糖含量。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、沸水浴、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、蒸馏水。
试剂的组成和配制:
试剂一:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体50mL×1瓶 ,4℃保存;
试剂三:液体5mL×1瓶 ,4℃避光保存;
样品中总糖的提取:
组织:称取约0.1g样品,加入1mL 试剂一,1.5mL蒸馏水,匀浆,95℃水浴中加热30min,加入1mL试剂二,混匀,用蒸馏水定容至10mL,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)
液体样本:取0.1mL样本,加入1mL 试剂一,1.5mL蒸馏水,匀浆,95℃水浴中加热30min,加入1mL试剂二,8000g 25℃离心10min,取上清液待测。(注意稀释,见注意事项)
总糖含量试剂盒测定步骤:
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、加样表:
试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
样本 |
| 40 |
蒸馏水 | 80 | 40 |
试剂三 | 60 | 60 |
混匀,置95度水浴中10min(盖紧,以防止水分散失),冷却至室温
混匀,540nm测定吸光值,ΔA=A测定管-A空白管
注意:1、空白管只要做一管。
2、如果ΔA大于2,需要将上清液用蒸馏水稀释,计算公式中乘以相应稀释倍数。
总糖含量计算:
1、标准条件下测定的回归方程为y = 0.4503x - 0.0507;x为标准品浓度(mg/mL),y为吸光值。
2、按样本鲜重计算:
总糖(mg /g鲜重)= [(ΔA+0.0507) ÷0.4503×V1]÷(W×V1÷V2)×稀释倍数=22.207×(ΔA+0.0507) ÷W×稀释倍数。
3、按样本蛋白浓度计算:
总糖(mg /mg prot)=[(ΔA+0.0507) ÷0.4503×V1]÷(V1×Cpr) ×稀释倍数=2.2207×(ΔA+0.0507) ÷Cpr×稀释倍数。
4、按照液体体积计算:
总糖(mg /mL)=[(ΔA+0.0507) ÷0.4503×V1]÷(V3×V1÷V2)×稀释倍数=77.73×(ΔA+0.0507)×稀释倍数。
V1:加入样本体积,0.04mL;V2:加入提取液体积,10mL/3.5mL; V3:液体样本,0.1mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
注意:最低检测限为1mg/g鲜重或10ng/mg prot
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