甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒说明书
分光光度50T/48S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒测定意义:
TG是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。
测定原理:
用异丙醇提取TG,脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸(FFA),甘油与三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2,过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在505 nm处有特征吸收峰。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配置:
试剂一:液体60 mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体26 mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体26 mL×1瓶,4℃避光保存。
TG的提取:
1、 组织中TG的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即TG待测液。
2、细胞、细菌中TG的提取:先收集400-500万细胞或细菌到离心管内,离心后弃上清,加1mL试剂一,超声波破碎1min(强度20%,超声2s,停1s),8000g,4℃离心10min,取上清,即TG待测液。
3、血清(浆)样品:直接测定。
甘油三酯(triglyceride, TG)含量测定试剂盒测定操作:
可见分光光度计预热30min,调节波长到505 nm。
试剂(μL) | 空白管 | 测定管 |
样本 |
| 50 |
试剂一 | 50 |
|
试剂二 | 475 | 475 |
试剂三 | 475 | 475 |
混匀,室温下静置20min,于505 nm波长处读取吸光值,记为A空白和A测定,△A=A测定-A空白。空白管只需测一管。
计算公式:
标准曲线:y = 0.6522x - 0.0199; R2 = 0.9979;x:标准品浓度(mg/mL) y:吸光值差值ΔA。
1. 血清(浆)中甘油三酯含量计算:
TG含量(mg/mL)=(ΔA+0.0199)÷0.6522=1.533×(ΔA+0.0199)
2. 组织、细菌或细胞中甘油三酯含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
TG含量(mg/ mg prot)= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V样÷(Cpr×V样)=1.533×(ΔA+0.0199)÷Cpr
(2)按样本质量计算
TG含量(mg/ g 鲜重)=(ΔA+0.0199)÷0.6522×V样÷(W×V样÷V样总)=1.533×(ΔA+0.0199)÷ W
V样:加入样本体积,0.01 mL;V样总:加入试剂一体积,1 mL;W:样本质量,g;
Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
注意事项:
1. 试剂盒中有易挥发性物质,实验过程中需佩戴手套和口罩,试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2. 最低检出限为100μg/mL。
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