一、 试剂盒简介
本试剂盒是简单快速从单细胞到cDNA的一步法试剂盒,无需复杂的RNA提取步骤,就可以从1-1000个细胞中获得cDNA。因为细胞数少,RNA比较少,所以本试剂盒是将逆转录和预扩增同时进行。只需预先设计预扩增引物,就可以获得高质量的cDNA。
二、 产品组分
Components
B0011 (100 Rxns)
Cell Lysis Buffer
5.5 ml
2× Pre-Amp Mix
1.1 ml
ddH2O
1 ml
三、 保存条件
此试剂盒建议置于-20℃冰箱中保存。
四、试剂盒特点
1、简单、快速:仅需2步即可得到高质量的cDNA。
2、所需样品少:最低可提取单个细胞。
3、安全无毒:不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。
四、 预扩增引物设计
1、 建议qPCR引物和预扩增引物在设计时靠近mRNA的3,端,以便确保被充分扩增。
2、 预扩增引物和qPCR引物进行跨内含子设计:即其扩增产物跨1个内含子。
3、 需要将qPCR扩增产物所在的序列包含在内(即预扩增引物需要在qPCR引物的外侧,上游更偏5,端,下游更偏3,端)。
五、 注意事项
1、本试剂盒是专为qPCR设计的,尽量不要用于基因克隆。
2、细胞从培养箱中取出后建议放在室温,切勿放在冰上,以免影响细胞状态。
3、Cell Lysis Buffer解冻后,需颠倒几次使之充分混匀,再放在冰上以备使用,请勿涡旋振荡。
4、如果qPCR结果内参Ct值明显偏大,则预扩增循环数可以由14个Cycle增加3个Cycle到17个Cycle。
苏州英泽生物医药科技有限公司
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