一、 试剂盒简介
本试剂盒是简单快速从细胞到cDNA的一步法试剂盒，无需复杂的microRNA提取步骤，试剂盒中含有gDNA Remover可有效去除基因组DNA，极大降低了基因组DNA的污染。具体过程是：根据细胞数，按照80 µl /10万细胞的量加Cell Lysis Buffer，吹吸10次，充分裂解细胞；吸出4 - 8 µl细胞裂解产物，加入0.8 µl gDNA Remover，室温反应5 min，即可去除基因组DNA。然后配制逆转录体系，充分混匀后，只需37℃反应15 min 、42℃反应10 min即可得到对应细胞内所有microRNA的cDNA。
二、产品组分
Component | EZB-miRT1 (50 Rxns) |
Cell Lysis Buffer | 11 ml |
gDNA Remover | 50 μl |
miRNA RT Enzyme Mix | 110 μl |
4× miRNA RT Buffer | 275 μl |
Universal 3’ qPCR Primer (10 μM) | 750 μl |
U6 Primer (10 μM ) | 150 μl |
Nuclease free ddH2O | 1 ml |
三、保存条件
此试剂盒建议置于-20℃冰箱中保存。
四、试剂盒特点
1、简单、快速： 仅需4步大约28 min即可得到对应细胞内所有microRNA的cDNA。
2、基因组残留少：配有gDNA Remover，可有效去除DNA污染。
3、所需样品少：最低可提取1000个细胞。
3、 安全无毒：不使用苯酚、氯仿、异丙醇、DEPC水等对身体有害的物质。
五、注意事项
1、本试剂盒是专为qPCR设计的，尽量不要用于基因克隆。
2、建议用24、48或96孔板培养细胞。细胞密度达到80%为。
3、细胞从培养箱中取出后建议放在室温，切勿放在冰上，以免影响细胞状态。
4、初次使用时建议对细胞进行计数，之后可参考细胞估数图进行估数。
5、Cell Lysis Buffer解冻后，需颠倒几次使之充分混匀，再放在冰上以备使用，请勿涡旋振荡。
6、本试剂盒是根据细胞来加裂解液，裂解液最少应该能够充分覆盖培养孔底部，否则过少容易导致吹出泡沫，或者裂解不充分。
7、gDNA Remover 和4× RT Mix在使用前都要上下颠倒混匀，短暂离心至管底。由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取。同时，要使用精确、量程适合的移液枪，并且不要使Tip插入液面过深，否则会因Tip壁粘着造成损失，而使酶量不足。
8、当同时需要进行数次反应时，应先配制各种试剂的混合液，然后再分装到每个反应管中。这样可使所取的试剂体积更准确，减少试剂损失，避免重复分取同一试剂。同时也可以减少实验操作或实验之间产生的误差。
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