货号:HH0106-01,HH0106-02,HH0106-03,HH0106-04;
技术指标
外观:白色或微黄色无定型冻干粉末;蛋白纯度:≥90%;比活性:≥150U/mg酶粉;过氧化氢酶:≤0.1%;蛋白酶:≤0.001%;肌酸酶:≤0.001%;ATP酶:≤0.001%。
酶学性质
来源:微生物;分类:EC3.5.2.10;分子量:29kDa(SDS-PAGE);等电点:5.3;Km值:5.0×10-2M(Creatinine),8.0×10-2M(Creatine);抑制剂:Hg2+,Cu2+,Fe3+;最适pH:7.0-8.0;最适温度:65℃;pH稳定性pH:5.5-10.0(25℃,16h);热稳定性:65℃以下稳定(pH8.0,30min);稳定性:-20℃静置保存12个月保持90%以上活性;保护剂:糖类以及BSA。
用途:水解肌酐,用于酶法肌酐试剂的研发和大量配制。
活性测定方法
原理:Creatinine+H2O-Creatinineamidohydrolase-Creatine
酶活定义:单位酶活定义为在下述条件下,每分钟催化反应生成1μmol肌酸所需的酶量。
试剂准备
试剂I:0.3M磷酸钾缓冲液,pH6.5。
试剂II:0.1M肌酐溶液(1.13g肌酐溶于100mLUP水中)。
试剂III:4%Na2CO3溶液(4.0gNa2CO3溶于100mLUP水中)。
试剂IV:2%α-萘酚溶液(2.0gα-萘酚溶于100mL99.5%乙醇中)。
试剂V:1.2gNaOH和3.2gNa2CO3溶于双蒸水中,定容至100mL。
试剂VI:0.05%二乙酰溶液(0.05mL二乙酰加水定容至100mL)。
酶稀释液:5mMTris-HClpH8.0
操作步骤
1.在5mL离心管中加入0.1mL试剂I,0.8mL试剂II。
2.37℃水浴5min。
3.加入0.1mL待测样品,37℃孵育10min。
4.加入2.0mL试剂III终止反应,取出置于冰上。
5.在新的5mL离心管中按顺序加入如下试剂:第4步的溶液:80μL;双蒸水:720μL;试剂IV:400μL;试剂V:400μL;试剂VI:400μL。
6.25℃静置1h后,加入2mL双蒸水稀释。
7.用分光光度计在525nm检测吸光度。
*用酶稀释液替代酶液,其它步骤相同,所得溶液吸光度为空白吸光度(ΔAb)ΔA=ΔAs-ΔAb
关键字: 肌酐酶;肌酐酶试剂;肌酐酶法;
瀚海新酶生物科技有限公司成立于2015年,是一家专业从事生物医药、体外诊断核心原料研发、生产、应用和技术服务的高新技术企业,在上海、武汉、苏州、青岛、宜昌等五地分别设立研发生产中心。