RNase R（Ribonuclease R）是一种来源于大肠杆菌RNR超家族的3’-5’核糖核酸外切酶，可从3’-5’方向将RNA逐步切割成二核苷酸和三核苷酸。RNase R可消化几乎所有的线性RNA分子，但不易消化环形RNA、套索结构或3’突出末端少于7个核苷酸的双链RNA分子。
RNase R是circRNA的富集和鉴定实验必备工具酶，可消化线性RNA以使环形RNA(circRNAs)或套索结构RNA(lariat RNA)得到富集。
RNase R消化RNA示意图
应用场景
circRNA的富集：高通量测序是大批量发现circRNA最快捷的方法，需要对circRNA进行富集，此时RNase R消化就是必须的。
circRNA的鉴定：根据RNase R(+)和RNase R(-)组中是否检测到条带来证明检测的分子是circRNA。
产品特征
特异性：特异性消化线性RNA
高效、快速：5-15min即可消化大部分线性RNA
buffer兼容性：消化产物可直接用于下游逆转录
使用方便：2种试剂，1步反应
产品信息
名称 | 货号 | 规格 | 目录价（元） | 保存温度 |
Ribonuclease R（RNase R) | R0301 | 500 U | 2280 | -20℃ |
R0302 | 5000 U | 询价 | -20℃ |
标准反应体系下，于 37℃，10 min 将 1 μg poly(A)转化成酸溶核苷酸所需的酶量定义为一个活力单位(U)。
产品组分
Storage Buffer |
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.1% Triton® X-100, 50% Glycerol |
10X Reaction Buffer |
200 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 M KCl, 1 mM MgCl2 |
反应体系
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 100 mM KCl, 0.1 mM MgCl2, 37℃孵育。
注：1）RNase R 在 0.1-0.5 mM Mg2+存在时活性最高，反应中 EDTA 可能降低 RNase R 活性，此时可额外添加 MgCl2 使 Mg2+ 浓度最高达到 0.5 mM。2）孵育后可于 70℃，10 min 使酶失活，再进行下游实验（如逆转录）；也可不灭活，直接纯化后进行下游实验。
质量控制
SDS-PAGE 检测纯度>99%；Total RNA 经 RNase R 消化后进行 RT-qPCR 检测，线性 RNA 丰度明显降低， 环形RNA 丰度基本不变。
性能比较：RNA电泳检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后直接进行电泳检测，结果显示RNase R+组28/18/5S条带变淡（不可见），表明RNase R对total RNA的消化作用。吉赛和公司e或公司a的RNase R对total RNA消化效果相当。
性能比较：qRT-PCR检测
将10U RNase R加入到2.5 μg total RNA中，于37℃孵育30 min，之后进行RT-qPCR实验，结果显示RNase R+ 组中hsa_circFOXO3_002和hsa_circMTO1_001的丰度基本不变，表明环形RNA耐受RNase R的消化。吉赛和公司e或公司a的RNase R效果相当。
注：数据计算以“RNase R+吉赛”组为对照，设定其相对丰度值为1
关键字： 核糖核酸外切酶;
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