产品概述
BstLDNA聚合酶是在野生型BacillusstearothermophilusDNA聚合酶I大片段(BstDNA聚合酶大片段)的基础上,通过定向进化、理性设计、半理性设计等多轮分子改造进化而来,相比于野生型BstDNA聚合酶大片段,BstLDNA聚合酶显著提升了扩增速度、
产量、耐盐性和热稳定性等性能。BstLDNA聚合酶具有5´→3´的聚合酶活性和强链置换活性,但没有5´→3´核酸外切酶活性。使用本产品能够大幅度提升环介导等温扩增(LAMP)体系的性能。
注:BstLDNA聚合酶的贮存液为:10mMTris-HC(lpH7.1),50mMKCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%甘油。
应用
1)用于LAMP等温扩增体系检测靶标DNA;
2)与瀚海RTL逆转录酶产品联合使用,进行RT-LAMP等温扩增检测靶标RNA。
运输与保存方法
0℃以下运输,-20℃保存。避免反复冻融,产品有效期18个月。
活力定义
65℃,30min内使10nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸内切酶残留检测:基于HHBstL反应缓冲液配制50μL反应体系,其中包含1μg的pUC19DNA和500U本酶,在37℃下孵育4小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,pUC19DNA电泳条带没有明显变化。
核酸外切酶残留检测:基于HHBstL反应缓冲液配制50μL反应体系,其中包含1μg的Lambda-HindIIIDNA和500U的本酶,在37℃下孵育4小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,电泳条带没有明显变化。
RNase残留检测:基于HHBstL反应缓冲液配制10μL反应体系,其中包含40ng的MS2RNA(3500nt)和8U本酶,在37℃下孵育16小时,由琼脂糖凝胶电泳检测,电泳条带没有明显变化。
大肠杆菌DNA残留检测:120U本酶中残留的核酸经E.coligDNA特异性的TaqManqPCR检测,E.coli基因组残留低于1拷贝。
实验流程
1)将10×HHBstLBuffer取出,冰上解冻,使用前涡旋10s混匀,并短暂离心。
2)除模板DNA外,其余组分按下表顺序配制反应混合液。
3)用移液器吹打混匀,并短暂离心。
4)60-65°C恒温孵育1h,观察扩增产物。
注意事项
1)10×HHBstLBuffer可以室温融化,融化后宜存放于冰盒内或冰浴上,使用完毕后应立即置于-20℃保存。
2)如果用本产品进行核酸检测,应当谨防扩增产物DNA造成的气溶胶污染,建议在PCR操作间中操作;扩增后的阳性样本不建议开盖,建议置于密闭塑料容器后丢弃。
3)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
关键字: BstL DNA 聚合酶;Bst DNA 聚合酶;Bst DNA Polymerase;
瀚海新酶生物科技有限公司成立于2015年,是一家专业从事生物医药、体外诊断核心原料研发、生产、应用和技术服务的高新技术企业,在上海、武汉、苏州、青岛、宜昌等五地分别设立研发生产中心。