鼻疽假单胞菌PCR检测试剂盒

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。

组成及试剂配制
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。

实验外包
1.基因组学：基因芯片、SNP检测、DNA甲基化检测、生物信息学分析
2.转录组学：microRNA芯片、LncRNA芯片、表达谱芯片、RNA-seq
3.蛋白质组学：2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因检测：DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白质检测：Western blot、Co-ip  EMSA、CHIP、免疫荧光、ELISA
6.病理检测：HE染色、特殊染色、组织切片、免疫组化、流式细胞分选
7.代谢组学：GC-MS、LC-MS、NMR
8.细胞及动物模型：原代细胞、细胞模型、动物模型构建
PCR实验步骤：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的lvfang，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚lvfang相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。
③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法测定先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
CEM/C1(急性细胞白血病细胞) 5×106cells/瓶×2 髓核细胞HNPC腺苷 5‘-（α,β-亚甲基）二1酸盐，钠盐质量规格：美国进口Adenosine 5'-(α,β-methylene)diphosphate,  salt

主动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml) 5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯甲基)-N6-苯甲酰基腺苷 质量规格：美国进口N6-Benzoyl-5'-O-DMT-adenosine

AK4 Others Human  AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 8-叠氮腺苷质量规格：美国进口8-Azido Adenosine 

中国仓鼠卵巢细胞系;pDSr a2-mpl-X2-肼基腺苷质量规格：美国进口2-Hydrazino Adenosine

Mo-MuLv/3T3细胞，Mo-MuLv感染的3T3细胞 胰腺癌细胞,SFPAC-1细胞 CM-M056小鼠肾实质细胞完全培养基100mL腺苷3',5'-环单1酸盐，N6-苯甲酰-钠盐质量规格：美国进口Adenosine 3′,5′-cyclic Monophosphate, N6-Benzoyl-,  Salt

阿莫曲普坦盐酸盐质量规格：美国进口Almotriptan   英文名称MouseEG-VEGFELISAKit小鼠的EG-VEGFELISAKit规格：96T/48T  大鼠晚期氧化蛋白产物(AOPP)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

蒽醌质量规格：AR,>98%Anthraquinone  冰冻切片神经元胞浆尼斯(NISSL)染色试剂盒50  人维生素B1(VB1)试剂盒 Human Vitamin B1,VB1 ELISA kit

1,3-二咖啡酰奎宁酸(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Cynarin  RatBcl-2associatedXprotein,BaxELISA试剂盒大鼠Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒规格：96T/48T  血清总胆(TC)含量测试盒 可见分光光度法 50管/48样

洋蓟素;1,5-二咖啡酰奎宁酸(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品1,5-Dicaffeoylquinic   小鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)ELISA试剂盒 ，英文名： PⅢP ELISA Kit  RatProstaticPhosphatase,PAPELISA试剂盒大鼠前列腺酸性1酸酶(PAP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

鼻疽假单胞菌PCR检测试剂盒咖啡酸乙酯（标准品）质量规格：含量测定ETHYL CAFFEATE  ELISAKitASGPR人去唾液酸糖蛋白受体规格：48T/96T  人抗Ku抗体(ai-Ku-Ab)ELISA试剂盒 ，英文名： ai-Ku-Ab ELISA Kit

柠檬酸无水质量规格：>99%,ARCitric   小鼠白介素15(IL-15)ELISA试剂盒 ，英文名： IL-15 ELISA Kit  RatLeptospiraIgG,LepIgGELISA试剂盒大鼠钩端螺旋体IgG(LepIgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T

柠檬酸无水（标准品）质量规格：含量测定Citric   大鼠血管生成素1(ANG-1)ELISA检测试剂盒RatAngiopoietin1,ANG-1ELISAKit 96T/48T  HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,G-CSFELISA试剂盒人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T

硫酸钾（标准品）质量规格：含量测定Potassium sulfate   人SH2携带蛋白(SHC/SLP-76)试剂盒 Human SHC/SLP-76 ELISA Kit  HumanLactoferrin，LTF/LFELISAKit人乳铁传递蛋白/乳铁蛋白(LF/LTF)ELISA试剂盒规格：96T/48T
使用方法：
一、样品DNA的制备用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL纯水（*用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。