参数规格:
产品名称:假皮疽组织胞浆菌PCR检测试剂盒
型号 : EY00P593
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
运输:低温
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
实验操作过程:
一、 CHO DNA 定量参考品的稀释及标准曲线的制备
用试剂盒中提供的 DNA dilution buffer 将 CHO control DNA 进行梯度稀释, 稀释浓度依 次为 300pg/ul 、30pg/ul 、3pg/ul 、300fg/ul 、30fg/ul 、3fg/ul 。具体操作如下:
1.将试剂盒中的 CHO control DNA 和 DNA dilution buffer 置于冰上融化,待完全融化后,
轻微振荡混匀,简短快速离心。
2.取 6 支干净的 1.5ml 离心管,分别标记为 SD1 ,SD2 ,SD3 ,SD4 ,SD5, SD6。
3,SD1 管中加入 198ul DNA dilution buffer,其余管中分别加入 180ul DNA dilution buffer。
4,取 2ul CHO control DNA 加入 SD1 管中, 然后涡旋振荡混匀 5- 10s 后短时快速离心 5s,涡旋振荡和快速离心各重复 3 次。
5,按表 2 依次进行 6 次梯度稀释操作,稀释操作同步骤 4。
表 2. CHO control DNA 的稀释
稀释管 | 稀释体积 | 浓度 |
SD1 | 2ul CHO control DNA+198ul DNA dilution buffer | 300 pg/ul |
SD2 | 20ul SD1+180ul DNA dilution buffer | 30 pg/ul |
SD3 | 20ul SD2+180ul DNA dilution buffer | 3 pg/ul |
SD4 | 20ul SD3+180ul DNA dilution buffer | 300 fg/ul |
SD5 | 20ul SD4+180ul DNA dilution buffer | 30 fg/ul |
SD6 | 20ul SD5+180ul DNA dilution buffer | 3 fg/ul |
二、加样回收质控 ERC 的制备
根据待测样本的残留量设置 ERC 中 CHO control DNA 的加样浓度 (以制备加 45pg CHO control DNA 的样本 ERC 为例),操作如下:
1,取待测样本 100u,加至 1.5ml 干净的离心管中;
2,加入 1.5ul SD2,混匀,标记为样本 ERC。
注:样本 ERC 和同批待测样本需一起进行样本前处理。
三、阴性质控 NEG 的制备
![4.png 4.png](https://www.chemicalbook.com/SupplyImg/2022-12-14/6380662532758413472732568.jpg)
根据实验设置阴性质控,操作如下:
1,取 100ul 样本基质溶液(或洗脱液)加至 1.5ml 干净的离心管中标记为阴性质控 NEG。 注:阴性质控 NEG 样本和同批待测样本需一起进行样本前处理。
四、 qPCR 反应液的制备和加样
1,根据所要检测的标准曲线及待测样本数量,计算所需反应孔数,一般做 3 个重复孔/样。
反应孔数= (6 个浓度梯度+1 个无模板对照 NTC+1 个阴性质控 NEG+待测样本×2) ×3 注:待测样本×2 是为了让每个待测样本检测时都同时做样本 ERC 。 2,根据反应孔数计算本次实验所需的各组分的所需总量以制备 pre-mix:
2×Taqman master mix=(反应孔数+2) ×15ul (含有 2 孔的损失量)
10×CHO qPCR mix= (反应孔数+2) ×3ul
RNase-free H2O= (反应孔数+2) ×2ul
3,各试剂置于冰上融化,振荡混匀,按表 3 所示进行加样:
表 3.各反应孔加样示例
标准曲线 | 20ul pre-mix+ 10ul SD1/SD2/SD3/SD4/SD5/SD6 |
NTC | 20ul pre-mix+ 10ul DNA dilution buffer |
NEG | 20ul pre-mix+ 10ul NEG |
待测样本 | 20ul pre-mix+ 10ul 待测样本 |
ERC 样本 | 0ul pre-mix+ 10ul ERC 样本 |
注意事项
1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8.ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
非洲绿猴肾细胞;VERO C1008 (E6) 中国仓鼠肺细胞,V79细胞 HCCC-9810(胆管细胞型肝癌细胞)分子筛, 5 Å(干燥剂用)质量规格:干燥剂用Molecular sieves, 5 Å
EB病毒转化的B细胞;KMY1008分子筛, 5 Å(pellets,3-5 mm)质量规格:pellets,3-5 mmMolecular sieves, 5 Å
CD27 Others Mouse 小鼠 CD27 / TNFRSF7 细胞裂解液 (阳性对照) 格列齐特质量规格:>95%,BRGliclazide
CM-R029大鼠肠平滑肌细胞完全培养基100mL格列齐特(标准品)质量规格:HPLC>95%,标准品Gliclazide
CDH18 Others Cynomolgus 食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 细胞裂解液 (阳性对照) 格列本脲质量规格:>99%,BRGlyburide/Gliebenclamide
假皮疽组织胞浆菌PCR检测试剂盒呋塞米(速尿)质量规格:>99%,BRFurosemide ELISAKitICAM-1/CD54人细胞间粘附分子1规格:48T/96T 膜内酰基肽酶(ANPEP)ELISA试剂盒 ,英文名: ANPEP ELISA Kit
呋塞米(标准品)质量规格:含量测定Furosemide 小鼠分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)ELISA试剂盒 ,英文名: SFRP4 ELISA Kit RatActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISA试剂盒大鼠白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒规格:96T/48T
吉非罗齐质量规格:>99%,USP,可用于细胞培养Gemfibrozil 人着丝粒蛋白B(CENP-B)ELISA检测试剂盒HumanCenomereProtein,CENP-BELISAKit 96T/48T Humancarbohydrate-deficieansferrin,CDTELISA试剂盒人糖缺失性转铁蛋白(CDT)ELISA试剂盒规格:96T/48T
吉非罗齐(标准品)质量规格:含量测定Gemfibrozil 大鼠热休克蛋白90-alpha(Hsp90aa1/Hsp86/Hspca)试剂盒 Rat Heat shock protein HSP 90-alpha,Hsp90aa1/Hsp86/Hspca ELISA kit Humandeltasleep-inducingpeptide,DSIPELISAKit人促睡眠肽(DSIP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
前肾上腺髓质素(45-92),人质量规格:>95%,BRProadrenomedullin (45-92)(human) HumanDehydroepiandrosteroneS7,DHEA-S7ELISA试剂盒人脱氢表雄同S7(DHEA-S7)ELISA试剂盒规格:96T/48T 大鼠嗜酸粒细胞趋化因子(ECF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
蛋白激酶C(19-31)质量规格:>95%,BRProtein Kinase C (19-31) 组织ITK激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20 人糖脂抗体(glycolipid)试剂盒 Human glycolipid aoaibody ELISA Kit
PLX4720质量规格:>98%,B-RafV600E抑制剂PLX-4720 HumanPlasmafibronectin,pFNELISAKit人血浆纤维连接蛋白(pFN)ELISA试剂盒规格:96T/48T 红霉素-N-脱甲基酶(ERND)测试盒 可见分光光度法 50管/24样
N,N-羰基二咪唑质量规格:>98%1,1'-Carbonyldiimidazole 兔子纤溶酶/纤维蛋白溶酶(PL/Fbn)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 RatSomalcellderivedfactor1a,SDF-1aELISA试剂盒大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒规格:96T/48T
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