碧云天生产的BJ5183-AD-1超级感受态细胞,英文名BJ5183-AD-1 Super Competent Cells,是一种可以用于腺病毒系统质粒克隆并具有较高重组能力的E. coli BJ5183-AD-1即用型化学感受态细胞。使用PCAMBIA2301质粒进行热激活转化,转化效率可以高达1×105cfu/μg DNA以上。
BJ5183-AD-1中携带pAdEasy-1质粒,其包含大部分人腺病毒5型的基因组序列(E1/E3基因缺失),表达供pAdEasy-1骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分,形成重组腺病毒质粒。实验过程中可直接转入线性化的携带目的基因的穿梭质粒,从而简化了实验步骤,并提高腺病毒质粒重组效率。
BJ5183-AD-1菌株的基因型为endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR)[pAdEasy-1 (AmpR)]。其中sbcBC和recBC的双重突变,赋予其较强的重组能力,有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组[1];recA1可减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA的稳定性;StrR使得该细胞具有硫酸链霉素抗性;pAdeasy-1使其具有氨苄抗性,一旦与穿梭载体重组,抗性消失。
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