保存条件
2~8℃可保存1年。Annexin V-Elab Fluor® 647禁止冷冻保存。
实验原理
Annexin V-Elab Fluor® 647 / PI 荧光双染细胞凋亡检测试剂盒,可用于检测悬浮细胞和贴壁细胞的凋亡。
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸 (PS) 有高度亲和力。当细胞发生凋亡时,膜内侧的磷脂酰丝氨酸 (PS) 外翻到膜表面,而被荧光染料Elab Fluor® 647标记的Annexin V结合,可通过流式细胞仪或荧光显微镜进行检测。
由于凋亡晚期或坏死细胞膜丧失完整性,而碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)可与双链DNA特异性结合并产生强烈的荧光,与Annexin V搭配使用,可区分处于不同凋亡时期的细胞。
本试剂盒检测喜树碱诱导的Jurkat细胞凋亡效果如下图所示:
![1678435002328353.png image.png](https://www.procell.com.cn/Public/upfile/article/1678435002328353.png)
试剂配制
1×Annexin V Binding Buffer:取1 mL Annexin V Binding Buffer (10×)加入9 mL去离子水中混匀。
实验操作
一步法
1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。
2. 取1~5 × 105重悬的细胞,300 ×g离心5 min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入500 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer重悬细胞。
3. 细胞悬液中加入5 μL的Annexin V-Elab Fluor® 647 染色液和5 μL的PI 染色液 (50μg/mL)。
4. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15~20 min。
5. 立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。
注:流式细胞仪检测时Annexin V-Elab Fluor® 647可用APC通道,PI优先选择ECD通道,其次是PE通道;如果样本有FITC通道的自发荧光,则选择PerCP/Cy5.5通道。
两步法
1. 细胞按照实验方案进行凋亡诱导,300 ×g离心5 min,弃上清,收集细胞,PBS洗涤一次,轻轻重悬细胞并计数。
2. 取1~5 × 105重悬的细胞,300 ×g离心5 min,弃上清。用PBS洗涤细胞一次,离心后弃上清,加入100 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer重悬细胞。
3. 细胞悬液中加入2.5 μL的Annexin V-Elab Fluor® 647染色液和2.5 μL的PI 染色液 (50μg/mL)。(由于两步法分辨率更高,染色液用量减半依然可得到媲美一步法的效果;用户亦可根据自己的模型进行滴定后加入适量的染色液,用更少的量获得高质量的结果。)
4. 轻柔涡旋混匀后,室温避光孵育15~20 min。
5. 加入400 μL稀释的1 × Annexin V Binding Buffer,混匀样本。
6. 立即上机检测。如不能及时检测,请于冰上避光静置并于1小时内完成检测。
注:流式细胞仪检测时Annexin V-Elab Fluor® 647可用APC通道,PI优先选择ECD通道,其次是PE通道;如果样本有FITC通道的自发荧光,则选择PerCP/Cy5.5通道。
注意事项
1. 本产品仅供科研使用。
2. 检测贴壁细胞时,需收集诱导凋亡后产生的悬浮细胞,并与后续收集的贴壁细胞一起检测。
3. 应尽量避免消化贴壁细胞带来的机械损伤。同时,胰酶的消化液中应尽量不含EDTA,因为EDTA会影响Annexin V与磷脂酰丝氨酸的结合。
4. 如果使用含EDTA的胰酶,收集细胞后应充分清洗,确保EDTA被去除干净。
5. 染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
6. 荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
(本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗)
货号 | 名称 | Storage | 规格1 | 规格2 | 规格3 | 规格4 |
P-CA-101 | Annexin V-FITC | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-103 | Annexin V-AF647 | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-105 | Annexin V-PE | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-107 | Annexin V-APC | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-151 | Annexin V Binding Buffer (10×) | 2-8℃,12个月 | 10mL | 50mL |
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P-CA-161 | 碘化丙啶(PI)染色液 | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-162 | 7-AAD染色液 | 2-8℃,12个月 | 50T | 100T | 200T | 500T |
P-CA-201 | Annexin V-FITC/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-202 | Annexin V-FITC/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-203 | Annexin V-AF647/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-204 | Annexin V-AF647/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-206 | Annexin V-PE/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-207 | Annexin V-APC/ PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
P-CA-208 | Annexin V-APC/ 7-AAD荧光双染细胞凋亡检测试剂盒 | 2-8℃,12个月 | 20T | 50T | 100T | 200T |
关键字: 试剂盒;
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