产品概述T7 RNA Polymerase,即T7 RNA聚合酶,是一种对T7噬菌体启动子具有高度特异性的DNA依赖性RNA聚合酶。该酶以含有T7启动子序列的单链或双链DNA为模板,以NTP为底物,合成与T7启动子下游的DNA一条链互补的RNA。产品组分
产品基本信息
产品应用用于单链RNA合成,包括mRNA,siRNA,gRNA等各类RNA前体。以及合成RNA探针,还可以利用帽类似物合成加帽RNA。实验流程1、将各组分解冻分别混匀后,短暂离心使液体收集于管底,置于冰上。2、体外转录体系
3、混匀、离心、37℃反应2-3 h。4、(选做)向反应体系中加入Dnase I,37℃孵育15 min,消化DNA模板。注意事项
模板DNA的纯度对体外转录过程影响很大。模板制备过程中的RNase残留会影响体外转录产生的RNA质量。模板DNA应为RNase-Free、高纯度,建议OD260/280为1.8~2.0。
添加体系时,模板最后加入。Transcription Buffer (10 ×)中含有亚精胺,亚精胺浓度过高会引起DNA模板沉淀。
反应体系中可添加RNase Inhibitor,防止RNase污染。建议20 μL体系中添加4 U RNase Inhibitor。
反应体系中可添加Pyrophosphatase, Inorganic,提高RNA产量。建议20 μL体系中添加0.02 U Pyrophosphatase, Inorganic。
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尚纯生物科技(武汉)有限公司
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