中文名:DiA(细胞膜绿色荧光探针)
英文名:DIA (cell membrane green fluorescent probe)
货号:D598344
包装:50mg
Cas号:114041-00-8
存储温度:2-8°C储存,避光
产品介绍:
DiA是一种细胞膜绿色荧光染料,它在细胞膜中的扩散速度比DiO快,并且经常和DiI一起使用于细胞膜双色标记。 DiA染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在固定透化(室温下用0.1% TritonX-100 透化)后,也可以很好地进行质膜染色。DiA对固定细胞的染色效果比DiO好。 以每次使用100 μL染色工作液,染色工作液浓度10 μM计算,50 mg配置为工作液大概可以用63532次。
注意事项:
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。 2. DiA染色固定的细胞或组织样品时,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 2. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
应用范围:
细胞膜荧光染料;主要用于细胞成像,细胞示踪和追踪
参数:
Ex/Em (MeOH) = 491/613 nm
使用方法:1. 染色液制备(1)配制储液:储液用无水 DMSO、无水 DMF 或 EtOH 配制,浓度 1~5 mM。DiA 在无水 DMSO 和无水 DMF 中的溶解度比在 EtOH 中的溶解度高。注:a.未使用的储存液分装储存在-20℃,避免反复冻融;b.发现较难溶解时可以适当加热,并用超声处理以促进溶解。(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS 或 PBS)稀释储液,配制浓度为 1~30 μM 的工作液。最常用的工作液浓度为 5-10 μM。注:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的 10 倍范围内开始最优浓度的摸索。2. 悬浮细胞染色(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为 1×106/mL。(2)37℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。(3)孵育结束,1000~1500 rpm 离心 5 min。倾倒上清液,再次缓慢加入 37℃预热的生长培养液重悬细胞。(4)重复步骤(3)两次以上。3. 贴壁细胞染色(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但要使表面保持湿润。(3)在盖玻片的一角加入 100 μL 的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。(4)37℃孵育细胞 2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以 20 min 作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片 2~3 次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育 5~10 min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。4. 结果检测样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
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