中文名:DiD(细胞膜红色荧光探针)
英文名:Did (cell membrane red fluorescent probe)
货号:D598346
包装:10mg
Cas号:362596-00-7
存储温度:避光,-20°C储存
产品介绍:
DiD染料是亲脂性荧光染料家族成员之一,它可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当DiD与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色,这类染料在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。DiD(远红色荧光)可以用来对活细胞进行成像和流式分析。DiD可以用633 nm He–Ne激光器激发,有着比DiI(一种常见的细胞荧光染料)更长的激发波长和发射波长,在细胞和组织染色中更有价值。 DiD染色后可进行多聚甲醛(不可使用甲醇等其他试剂)的固定,但不建议在染色后进行透化的过程。此外,在固定透化(室温下用0.1% TritonX-100 透化)后,也可以很好地进行质膜染色。 以每次使用100 μL染色工作液,染色工作液浓度5 μM计算,10 mg配置为工作液大概可以用19009次。
产品参数:
Ex/Em (MeOH) = 644/663 nm
注意事项:
1. 使用前请将产品瞬时离心至管底,再进行后续实验。 2. DiD染色固定的细胞或组织样品时,通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。 3. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
应用范围:
细胞膜荧光染料;神经元顺行和逆行示踪;细胞长期示踪
使用方法:1.染色液制备(1)配制储液:储液用无水DMSO或EtOH配制,浓度1~5mM。注:未使用的储存液分装储存在-20°C,避免反复冻融。(2)工作液制备:用合适的缓冲液(如:无血清培养基,HBSS或PBS)稀释储液,配制浓度为1~5μM的工作液。注:工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度的10倍范围内开始最优浓度的摸索。2.悬浮细胞染色(1)加入适当体积的染色工作液重悬细胞,使其密度为1×106/mL。(2)37°C孵育细胞2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记效果。(3)孵育结束,1000~1500 rpm离心5 min。倾倒上清液,再次缓慢加入37°C预热的生长培养液重悬细胞。(4)重复步骤(3)两次以上。3.贴壁细胞染色(1)将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。(2)从培养基中移走盖玻片,吸走过量培养液,但要使表面保持湿润。(3)在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液,轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。(4)37°C孵育细胞2~20 min,不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记的效果。(5)吸干染料工作液,用培养液洗盖玻片2~3次,每次用预温的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10 min,然后吸干培养基。但要使表面保持湿润。4. 结果检测样品可在培养基中进行检测,可通过荧光显微镜成像或流式细胞仪分析。
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