中文名:T7 RNA Transcription Enzyme Mix
英文名:T7 RNA Transcription Enzyme Mix
纯度:医药级
货号:T489304
包装:10000t、1000t、50t
存储温度:-20°C储存
产品介绍:
产品描述
作为生物大分子,mRNA只能通过体外转录(IVT,in vitro transcription)的方法大规模合成,T7启动子是目前转录效率最高的启动子之一,因此采用T7 RNA聚合酶(T7 RNA Polymerase)进行体外转录可获得更多的合成产物。T7 RNA Transcription Enzyme Mix进行了转录反应体系的优化,从模板DNA T7启动子下游开始合成与DNA中一条链互补的RNA,简单快速获得大量的RNA分子。一个反应可以转录高达150-200μg的RNA,转录合成的RNA可用于诸如mRNA疫苗的制备、RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi、显微注射及体外翻译等多方面的下游应用。
T7 RNA Transcription Enzyme Mix组成原酶利用大肠杆菌大规模发酵表达,采用药用规格原辅料生产,并严格控制宿主蛋白质残留、核酸残留等,符合GMP规范的产品生产与质量管理规程保障生产过程及所有原辅料可追溯。
质量要求
项目 |
标准 |
外观 |
澄明液体 |
可见异物 |
符合规定 |
pH值 |
7.5-8.5 |
性能 |
1μl Enzyme Mix 产品可转录出不低于100μgRNA |
核酸内切酶残留 |
底物的降解不超过10% |
核酸外切酶残留 |
底物的降解不超过10% |
RNA酶残留 |
底物的降解不超过10% |
细菌内毒素含量 |
≤10EU/ml |
外源性DNA残留 |
≤100pg/mg |
宿主蛋白质残留 |
≤50ppm |
支原体检测 |
阴性 |
重金属残留 |
≤10ppm |
|
遵循以下规范生产
1. ISO 9001:2015, certified facility。
2. 《GMP附录-细胞治疗产品》国家药品监督管理局。
3. 《人用基因治疗总论-中国药典2020》国家药典委。
4. USP Chapter <1043>, Ancillary Materials for Cell, Gene, and Tissue-Engineered Products用于细胞治疗,基因治疗和组织工程产品中的辅料。
5. USP Chapter <92>, Growth Factors and Cytokines Used in Cell Therapy Manufacturing 细胞治疗产品生产过程中细胞因子和生长因子。
6. Ph. Eur. General Chapter 5.2.12, Raw Materials of Biological Origin for the Production of Cell-based and Gene Therapy Medicinal Products用于生产细胞或基因治疗药物的生物来源原料。
产品用途
1) 合成单链RNA,用于mRNA疫苗制备;
2) 合成高特异性RNA探针;
3) 合成siRNA前体;
4) 制作RNA剪接反应(RNA splicing)的前体。
保存温度
-20±5 ℃。
注意事项
1. 模板效率和孵化时间:
本试剂盒以1μg的模板投入量可以产生150-200μg的RNA,然而,不同模板的产量会因模板的序列、结构、长度、纯度以及特定RNA聚合酶启动子的序列和长度而有所不同。影响转录产量的污染物包括核糖核酸酶或污染物,如苯酚、微量金属和SDS。
2. 优化的反应:
推荐的反应条件可适用于大多数模板的体外转录,但是,对于某些模板,可以通过延长反应时间(4小时-过夜反应),增加模板的用量来提高产率。
3. 模板含量:
下表总结了我们在调控模板数量方面的经验。结果可能因使用的模板而异,将反应时间延长至4-6小时可增加RNA的产量。
模板量 |
RNA产量 |
1000ng(1μg) |
130-160μg |
500ng(0.5μg) |
110-130μg |
100ng(0.1μg) |
30-50μg |
50ng(0.05μg) |
15-25μg |
10ng(0.01μg) |
10-20μg |
1ng(0.001μg) |
3-8μg |
|
4. 保持RNase-free环境:
使用无RNase管和移液枪;
处理含有RNA的试剂盒组件或样品时应戴手套,并经常更换手套,特别是接触到RNase的潜在污染源,如门把手、钢笔、铅笔和人体皮肤后。
不使用时,应将所有试剂密封好。在孵育过程中,将所有含有RNA的试管密封。
5. 由于10×Transcription Buffer浓度偏高,高盐环境会导致聚合酶失活,同时buffer中含有亚精氨成分,会与模板DNA形成沉淀,配制反应液时需调整组分加样顺序,计算好体系,先加水,然后加buffer,NTP,最后加模板和酶,以防止10×的高浓度盐离子对酶造成影响。
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