河豚毒素ELISA检测试剂盒使用说明书
货号：Ounuo97001
本品采用竞争性酶免检测技术用于鲀鱼类肌肉、肝脏、皮肤等样本中河豚毒素的定量分析，最大可满足96次测试，在做复孔的情况下，一次最多可检测42个样本。
产品特性：
快速（＜30min）、高回收（≥80%）和高效的前处理方法
高灵敏度（1.5μg/kg,或ppb）和检测限低（30μg/kg，或ppb）
快速，检测时间＜1.5h
高的重现性
检测限：
鱼肉、肝脏、鱼皮：30μg/kg
定量限：
鱼肉、肝脏、鱼皮：50μg/kg
一、使用须知：
当与仪器方法结果相比时，试剂盒的结果偏高这是很正常的现象。因为仪器方法仅测量的单一化合物，而试剂盒中的抗体由于不仅能识别目标分子且还能识别结构上相似的分子，包括其相关的代谢产物。因此，使用人员需要明白本产品的局限性和对数据做出合理的分析。
任何试剂、检测程序的改变都可能导致检测失败。
不要使用超过有效期的产品；不同批次的产品不得混用。
实验用水的质量很重要，请使用蒸馏水或去离子水。
微孔板开封后，需置于有干燥剂的密封袋中冷藏保存，建议于一个月内使用完。
二、需要但未提供的设备和试剂：
酶标仪：配备450nm波长
单道移液器：0.5-10、20-200、100-1000μL、0.5-5mL量程各一支
多道移液器：30-300μL量程一支
白色、黄色和蓝色吸头若干
恒温培养箱
均质器或绞肉机
恒温水浴锅
甲醇，分析纯
乙酸，分析纯
三、样本前处理：
一般来说，组织样本在2-8℃最多保存1-2天，如长时间不用，建议分装成适量小份于-20或-80℃保存，请勿使用反复冻融的样本。【注释：废弃的阳性样本应作为有毒废弃物处理】
准备
(1) 样本提取液
分别量取甲醇40mL、蒸馏水60mL、冰乙酸0.1mL混匀。
(2) 1×样本稀释液
按1份体积4×样本稀释液和3份体积的蒸馏水混匀。
鱼肉、肝脏、鱼皮
(1) 称取2g均质的样本于一合适的容器中，加入10mL样本提取液涡旋30s;
(2) 放置于90℃水浴中10min，期间手摇样本3次；
(3) 自来水降温1min，加入1mL正己烷涡旋30s；4000rpm，离心5min；
(4) 取中间层清液100μL，加入300μL 1×样本稀释液混匀，取50μL点样
稀释倍数：
20四、检测步骤检测前准备
所有试剂需回复至室温（在20-25℃下，从试剂盒中取出并放置1-2h）;
检测开始前需准备好所需试剂；
取出所需体积的试剂，其余放回盒内；
未使用完的试剂请勿倒回原试剂瓶内，移取每一种试剂需更换吸头，以免交叉污染；
请不要在通风口、阳光直射下检测，以避免造成微孔微环境差异导致检测失败；
标准品、阳性样本以及用过的吸头和器皿均应做有毒废弃物处理。
检测前准备
所有试剂需回复至室温（在20-25℃下，从试剂盒中取出并放置1-2h）;
检测开始前需准备好所需试剂；
取出所需体积的试剂，其余放回盒内；
未使用完的试剂请勿倒回原试剂瓶内，移取每一种试剂需更换吸头，以免交叉污染；
请不要在通风口、阳光直射下检测，以避免造成微孔微环境差异导致检测失败；
标准品、阳性样本以及用过的吸头和器皿均应做有毒废弃物处理。
洗液（1×）配制
取1体积的20×浓缩洗液，加入19体积的去离子水或蒸馏水混匀
检测步骤
(1) 移取50μL河豚毒素标准品至相应微孔中；
(2) 移取50μL样本至相应微孔中；
(3) 移取50μL酶结合物至所有微孔中；
(4) 加入50μL河豚毒素抗体至每一所需微孔中，用手指肚轻轻敲击微孔板架两侧混匀1min；
(5) 室温（20-25℃）孵育30min；
(6) 甩干微孔板，加入300μL 洗液（1×），浸泡5s后倒出洗液，再重复4次，甩干并于无尘布上拍干；
(7) 加入100μL底物，室温（20-25℃）避光孵育15min;
(8) 加入100μL终止液，于450nm下读数
五、结果计算（1）以logit(B/B0）为y轴，以log（分析物浓度）为x，进行线性拟合。
其中公式如下
logit(B/B0)=k ln〖(concentration)+c〗①
B为标准品或样本对应的吸光度；
B0为零标准品对应的吸光度；
logit(B/B0)=〖ln(〗〖(B/B0)/(1-B/B0))〗;
K为斜率；
C为截距
（2）计算出样本的平均吸光度和样本的B/B0值代入公式①中求出浓度并乘以对应的稀释倍数，即为样本中待测物最终浓度
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