作为对类黄酮生物合成关键酶的作用和位置研究的一部分,禾本科叶组织中的查尔酮合酶 (CHS) 被纯化并进行了生化和免疫学表征。方法和结果:底物p-香豆酰辅酶A和咖啡酰辅酶A的Km值分别为0.6和1.45 μM,丙二酰辅酶A的Km值分别为1.4和1.5 μM。形成2′,4,4′,6′-四羟基查耳酮的最适pH值为8,形成2′,3,4′,6′-五羟基查耳酮的最适pH值为6.5。9 μM 芹菜素、13 μM 木犀草素、36 μM 辅酶 A、45 μM 柚皮素、45 μM 荆荆素 2''-O-阿拉伯糖苷引起酶活性降低 50%。纯化酶的SDS-PAGE分析揭示了两种肽,表观分子量分别为43和44 kd。结论:在使用纯化酶和粗酶提取物运行的蛋白质印迹中,两种肽均通过针对黑麦或欧芹CHS的多克隆抗体进行免疫染色。单克隆抗体对这些肽的识别表明,两种肽相似且来源于CHS。 应用于使用含有CHS的欧芹、菠菜、豌豆、玉米和燕麦提取物进行的蛋白质印迹,相同的抗体仅标记单个肽,或者在某些情况下甚至可能标记两个以上的肽。
已从黑麦的初级叶中分离出两种异牡荆素 2“-O-糖苷,鉴定为异牡荆素 2''-O-阿拉伯糖苷和异牡荆素 2。
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王玲