方法和结果:以 L-苯丙氨酸为例,研究了适用于甲基营养细菌生物医学应用的稳定同位素标记的氨基酸的制备微生物合成( 2 H)。该氨基酸由革兰氏阴性需氧兼性甲基营养细菌 Brevibacterium methylicum 分泌,通过核酮糖-5-单磷酸 (RMP) 碳同化循环同化甲醇,甲基营养细菌 В. methylicum 分泌的 L-苯丙氨酸适应生长培养基中氘的最大浓度的数据,含量为 98% 2 Н 2 O 和 2% [ 2 Н]甲醇, 并提出了具有不同富集水平的氘标记的L-苯丙氨酸的生物合成。该菌株通过在坚硬的(2%琼脂糖)最小生长培养基上接种初始细胞来适应,从0开始,梯度为2Н2O浓度;24.5;49.0;73.5高达98%2Н2O,随后选择对2Н2O作用稳定的独立菌落。这些菌落能够产生L-苯丙氨酸。L-苯丙氨酸通过用异丙醇提取从生长培养基中提取,随后在乙醇中结晶(产量0.65 g/l)。结论:所开发的微生物合成方法允许获得具有不同同位素富集水平的氘标记的 L-苯丙氨酸,具体取决于生长培养基中 2 Н 2 O 的浓度,从 17%(在生长培养基上为 24,5% 2 Н 2 O)到 75%(在生长培养基上为 98% 2 Н 2 O)的氘在分子中,这得到了甲基醚的电子冲击 (EI) 质谱分析数据的证实在这些实验条件下的N-二甲氨基(萘)-5-磺酰氯(丹磺酰基)苯丙氨酸。
方法和结果:以甘油为碳源,以重组大肠杆菌菌株为研究对象,采用 15 L 尺度研究芳香族氨基酸 L-苯丙氨酸的补料分批生产。将通量变异性分析(FVA)应用于细胞内通量估计,以深入了解L-苯丙氨酸生产过程中的细胞内通量分布。变异性分析揭示了中心碳代谢中较大的通量不确定性,特别是在苹果酸消费方面。由于这些结果,两种重组菌株被基因工程改造,它们在苹果酸降解和厌娠反应的能力上有所不同(大肠杆菌 FUS4.11 ΔmaeA pF81kan 和大肠杆菌 FUS4.11 ΔmaeA ΔmaeB pF81kan)。在标准化的 L-苯丙氨酸生产工艺中应用这些苹果酸酶敲除突变体可产生几乎相同的工艺性能(例如,L-苯丙氨酸浓度、生产率和副产物形成)。这清楚地突出了大肠杆菌中枢代谢的巨大冗余。结论:在补料分批生产 L-苯丙氨酸期间,通过基于约束的分析估计细胞内通量的不确定性通过应用苹果酸酶敲除突变体大大降低。
众所周知,基于阳离子氨基酸的表面活性剂会与细胞膜的脂质双层相互作用,从而通过破坏膜拓扑结构导致去极化、裂解和细胞死亡。方法和结果:合成了一系列源自 L-苯丙氨酸 (C1-C20) 和 L-酪氨酸 (C8-C14) 酯的阳离子表面活性剂类似物,并筛选了它们的抗菌活性。
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王玲