品名：Smart-antibody™ Protein A抗体纯化试剂盒，货号：P4143，品牌：Engibody
订购及技术咨询：朱小鸥，13817407320(微信同号)
保姆级抗体纯化试剂盒（Protein A法）
Smart-antibody™
Protein A抗体纯化试剂盒的优势
1、本试剂盒可以纯化来自腹水，血清，细胞培养物上清等样本形式的抗体。
2、试剂盒中的Protein A纯化填料可以重复使用10次以上，偶联在琼脂糖珠上的Protein A是纯化人、兔、猪、狗或猫IgG（单克隆及多克隆）的理想选择，高特异性，高稳定性，高亲和力，低配基脱落。
3、本试剂盒是一个Complete All-In-One Kit — 包含全部试剂及耗材，高效结合缓冲液、平衡缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、中和液、protein A填料、重力空柱（带控流阀）、脱盐浓缩柱、抗体储存液、以及下游WB检测所需的高特异性山羊抗兔二抗（HRP标记）。
第一部分：背景简介及应用场景
Protein A、Protein G与抗体的结合特性比较
1、Protein A Agarose Resin 6FF、rProtein A Agarose Resin 6FF与抗体的结合
目前，约70-80%的抗体纯化使用Protein A及Protein G亲和层析。蛋白A (Protein A)来源于金黄色葡萄球菌的一个株系，它含有5个可以和抗体lgG分子的Fc段特异性结合的结构域。蛋白A作为亲和配基被偶联到琼脂糖基质上，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他杂蛋白流穿，具有极高的选择性，一步亲和层析就可达到超过95%的纯度。
天然的Protein A有5个IgG结合结构域和未知功能的非Fc结合域，结构示意图如下：
此结构的蛋白A大量结合IgG的同时，其非Fc结合域能结合部分杂蛋白，导致洗脱下来的IgG纯度不够，因此科学家利用基因工程的方法克隆Protein A的基因并进行改造，得到重组型蛋白A，其非特异性结合明显降低。重组的蛋白A经过改造后在C端加入了一个半胱氨酸，可以定点偶联到琼脂糖珠上，降低空间位阻的同时提高IgG的结合能力。一步亲和层析后样品纯度可超过95%。
但蛋白A与lgG的结合强度很大程度上依赖于该抗体的种属和亚型，而其动态结合能力则决定于结合强度(解离常数)及流质阻力等多种因素(例如上样时样品在柱内的停留时间)。
本试剂盒中使用的即是优化重组的蛋白A (rProtein A)偶联的Agarose Resin 6FF
2、Protein G Agarose Resin 6FF与抗体的结合
蛋白G是一种源自链球菌G族的细胞表面蛋白，为三型Fc受体。其通过类似于蛋白A的非免疫机制与抗体的Fc段结合。像蛋白A一样，蛋白G可以与IgG的Fc区域特异性结合，不同的是，Protein G可以更广泛、更强地结合更多类型的lgG, 同时血清蛋白结合水平更低，纯度更高，配基脱落也相对更低。此外，蛋白G还可以和某些抗体的Fab和F (ab)2段结合。
与蛋白G相比，蛋白A对兔、猪、狗和猫的IgG亚类提供了最高的结合能力。除IgG3外，蛋白A对人IgG也具有更高的结合能力，人IgG3结合较弱。另外，蛋白A与小鼠IgG1结合较弱，不推荐用于该抗体类型的大多数应用。
Engibody品牌Protein A填料的优势：
货号：P2108，品名：Protein A Agarose Resin 6FF
1、Protein A经过了序列优化并进行了重组表达，protein A与琼脂糖微球偶联时用的是氨基酸序列C末端最后一个半胱氨酸（基因工程改造得到的），因为半胱氨酸在蛋白序列中比较稀有，这样可以基本实现把protein A定点定向偶联到agarose beads上，使得agarose beads上的Protein A分子均处于有效的空间构象，纯化效率和亲和力得到大大提升！
2、因其基质的耐压性（可耐受最高0.3 MPa的压力），该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化，可在相对较高的流速下，实现对目的抗体的纯化。
Protein A和Protein G对不同种属和不同抗体亚型有不同的结合能力
需要根据这个表格来选择适合目的抗体的纯化填料
第二部分：技术原理
Protein A填料捕获抗体分子的微观示意图
Protein A结合抗体分子CH2结构域和CH3结构域的交界部位
第三部分：技术流程
第四部分：结果展示
兔抗体血清经过Protein A琼脂糖填料纯化后的SDS-PAGE检测结果
Purification of rabbit IgG using Protein A resin 6FF.
High purity and high capacity of Protein A resin 6FF.
5 mL rabbit serum was loaded on the column containing 0.5 mL settled Protein A resin 6FF. Bound immunoglobulin species were eluted with elution buffer (Neutralization buffer was added before). Fractions were analyzed by SDS-PAGE.
Lanes: (1) Raw rabbit serum; (2) Flow-through; (3) Elution. Note that, heavy and light chains of IgG were mostly absent from the flow-through, indicating that most immunoglobulins were bound to the column.
第五部分：抗体纯化试剂盒组分清单
（共计10个组分，均可单独购买）
| 编号 | 组分名称 | 数量 | 保存 | 注意事项 |
| 下列组分收到后需储存在 4 °C中。 |
| P2108 | Protein A agarose Resin 6FF for Antibody Purification（Protein A填料） | 5 mL | +4 °C | 含有2.5 mL settled resin, 填料可以重复使用10次以上 |
| ANTI-01 | 样本稀释Buffer for Antibody | 50 mL | +4 °C |
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| ANTI-02 | Binding / Equilibration Buffer for Antibody (BE缓冲液 for Antibody) | 100 mL | +4 °C |
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| ANTI-03 | Wash Buffer for Antibody | 250 mL | +4 °C |
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| ANTI-04 | IgG Elution Buffer for Antibody | 50 mL | +4 °C |
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| ANTI-05 | Neutralization Buffer | 2.5 mL | +4 °C |
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| 下列组分收到后需储存在室温中 |
| PURI-04 | 重力柱空柱 (12mL) 及控流阀 | 1个 | 室温 |
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| IF9217 | QuickStain™ One-Step Protein Gel (PAGE) Blue Stain
蛋白PAGE胶快速染色液 | 50mL | 室温 | 超快染色蛋白胶，灵敏度极高，10分钟即可让低至10ng的蛋白显示条带 |
| 下列组分收到后必须要储存在 -20 °C中 |
| AT0097 | 山羊抗兔二抗HRP标记 | 100 µL | -20 °C | 用于下游WB检测 |
| AT1597 | Rabbit normal IgG抗体阳性对照 | 100 µL | -20 °C | 用于下游WB检测 |
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关键字： Protein A;抗体纯化填料;抗体纯化试剂盒;兔抗体纯化;
复名表观遗传学（上海复名医疗科技有限公司），专注于表观遗传学研究工具的开发和表观技术服务的提供。
经过多年和全球著名大学表观研究领域专家教授的交流和探讨，积累经验，精准解决表观研究工具领域的痛点难点，在表观基因组学、表观转录组学和表观蛋白组学领域均开发了一系列研究试剂盒并提供表观技术服务，和哈佛大学，华盛顿大学，斯坦福大学，麻省理工学院，UCSC，UCSF，HHMI，德国海德堡大学，法国国家健康与医学研究院inserm等世界名校均建立了密切的合作和交流，所开发的抗体，试剂，试剂盒受到了全球客户的欢迎。
Engibody为复名表观遗传学旗下品牌，所开发的抗体，试剂，表观试剂盒在全球范围内销售，受到众多世界著名大学课题组老师及医药500强巨头的认可和喜爱。
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