细胞转染是外源基因进入真核细胞的一种重要方法。这些外源DNA或RNA通过转染试剂的包装辅助,才能顺利进入细胞发挥相应的作用,进而研究其细胞功能及相应的影响。riboFECT™ CP转染试剂是一种专门用于核酸分子的转染试剂,极具生物相容性、转染效率高、细胞毒性小,适合各种核酸分子,如siRNA、miRNA转染实验,不推荐用于质粒转染,突出优势是无需进行培养基更换操作,尤其适合各种高通量细胞筛选实验,方便、快速、高效。
1、高转染效率,适用于大多数细胞的转染实验2、低细胞毒性,对细胞伤害小,对大多数细胞转染均无需更换培养液3、操作简单方便,可反向转染,适合高通量筛选实验
转染效率对基因沉默实验至关重要,riboFECT™ CP转染试剂极具生物相容性,能够显著提高siRNA、miRNA的转染效率,保证RNAi实验的顺利进行,并能够降低各种核酸分子使用浓度,目前已成功应用于各种真核细胞系的核酸转染,如HeLa、A549、293T、NIH/3T3、HepG2、HUVEC等细胞系。
图1 分别用riboFECT™ CP转染HUVEC(A)和Hela(B)细胞,采用riboMONITOR™检测转染效率
图2 用riboFECT™ CP和Reagent L分别转染p65 siRNA于HUVEC和Hela细胞,采用qPCR方法检测其基因沉默效率。
结果显示riboFECT™ CP转染效果更好,且随着转染试剂用量升高,转染效果越好,基因沉默效率也进一步提高。
仅需简单地将siRNA或miRNA与buffer混合后,加入riboFECT™ CP形成复合物,室温孵育0~10分钟,再加入一定体积的培养液,随后加入完全细胞培养基中即可,中途无需更换培养基。
反向转染实验中,先将siRNA或miRNA与riboFECT™ CP混合,加至培养孔以形成转染复合物,再将细胞加入至培养孔中进行反向转染,以实现细胞高通量筛选。其中,转染混合物制备后可保存较长时间,即允许提前准备和储存,非常适合自动化高通量筛选系统。
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