确定细胞转染效率的高低非常重要,通过特异的核酸转染指示剂转染进入细胞核并结合两种染料,可以精确定量地分析转染效率及细胞毒性。
riboMONITOR®转染指示剂试剂盒包含3种染料:riboTRACER™ Green、NUCLEOstain™和DEADstain™,分别是用于检测成功转染细胞、全部细胞和死亡细胞。其中riboTRACER™ Green能够在转染后富集于细胞核,不依赖于siRNA或miRNA序列,可方便、快速、准确地定量分析细胞转染效率,以便对siRNA或miRNA转染条件做进一步优化。
产品优势
1、使用方便:仅需3步,荧光显微镜观察即可
2、准确定量:富集于细胞核,精确定量转染效率
3、毒性分析:可同时分析细胞毒性,优化转染试剂用量
哪种转染试剂适合您?
锐博生物提供从siRNA/miRNA、mRNA/长链RNA到蛋白质的全系列转染试剂,请根据下表确定适合您的转染试剂。
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siRNA/miRNA/质粒转染试剂 基因抑制效率高
| mRNA/长链RNA转染试剂 适用于原代细胞 | 蛋白质转染试剂 可实现高效转染 |
| riboFECT™ CP转染试剂 | riboFECT™ mRNA转染试剂 | riboFECT™ Protein转染试剂
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试剂规格 | 0.5ml, 1ml | 0.5ml, 2.5ml | 0.5ml, 2.5ml |
样品类型 | siRNA, miRNA | mRNA, 长链RNA | 蛋白质 |
转染效率 | 很好 | 很好 | 高达98% |
细胞活力 | 很好 | 很好 | 好 |
细胞毒性 | 超低 | 超低 | 几乎无细胞毒性 |
转染细胞系 (部分) | HeLa,A549,HEK293T,HCT-116, NIH/3T3,HepG2,HNE1, L6,5637,H-bc,HSC,C2C12, Sertoli,CNE-2,5-8F, HAEC,DRG,CF,THP-1,MEL, PBMC,NSC,MSC,U2OS | human fibroblasts, CHO-K1, B16-F10,HEK293 |
HEK293,B16-F10,COS-7, COLO 205,dendritic cells (DC), H9c2,human fibroblasts (primary cells), HUVEC (primary cells), Jurkat,MC3T3-E1,MEF (primary cells), microglia, mouse podocytes (primary cells), NIH/3T3,SK-OV-3,U-373 MG
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技术支持
评价实验细胞系转染的难易度
不同细胞系的转染效率差异很大,如何鉴定目的细胞系是否适合转染是细胞转染实验的基本问题。通常用荧光标记的siRNA或miRNA进行相应的转染对照试验,但该类转染对照不均匀地分布于细胞各处,有时甚至会粘连成团,很难定量分析细胞的转染效率。riboTRACER™是细胞核富集的核酸指示剂,通过与细胞核染料结合,即可精确定量分析细胞转染效率和细胞毒性
图1 使用riboMONITOR®检测riboFECT™ CP转染siRNA于不同细胞系的转染效率
Cells transfected with riboTRACER™ Green (100nM) with riboFECT™ CP (5 µl/well),
fixed with PFA, stain with NUCLEOstain™ and DEADstain™, 20X of microscope.
评价转染试剂的转染效果与细胞毒性
不同的转染试剂的转染效果差别很大,不恰当地选择转染试剂使转染效率低下,甚至导致细胞的大量死亡。riboMONITOR®通过荧光定量检测成功转染的细胞、死亡细胞、全部细胞,实现了细胞转染效率和细胞毒性的同时评估。
图2 使用riboMONITOR® 转染指示剂检测3种转染试剂转染293T细胞的转染效果
Reagent L的转染试剂细胞毒性较大,易引起细胞大量死亡,Reagent X转染试剂的转染效率不高。
而riboFECT™ CP的转染效率较高,几乎无细胞毒性,能够顺利转染293T细胞。
优化转染条件,监测转染效果
转染试剂用量和细胞密度是转染实验成功的关键,确保转染效果的批次间的稳定性,是实验可重复性的重要保证。riboMONITOR® 通过结合细胞核染料,可快速检测出细胞的转染效率,优化最佳的转染试剂用量及细胞密度,确定最适宜的转染条件,以实现细胞的高效转染,减少实验中不必要的实验摸索。
A-B:采用0.4µl和1µl的Reagent L转染Hela细胞的转染效果及细胞毒性检测;
C-D:采用0.4µl和1µl的Reagent L分别进行4万和5万细胞的转染实验,结果表明采用1µl Reagent L,
4万细胞进行转染时转染效率最高(C),细胞毒性最小(D)
关键字: 细胞转染;转染指示剂;
广州市锐博生物科技有限公司(简称锐博生物)成立于2004年,是一家由诺贝尔奖获得者和国家重大人才工程入选者领衔的、以核酸技术为核心的国家火炬计划重点高新技术企业。基于世界领先的寡核苷酸和mRNA技术,锐博生物致力于提供高品质的各类寡核苷酸和mRNA产品(包括但不限于ASO、siRNA、CpG、Aptamer、crRNA、和tracrRNA)。此外,公司建立了符合或超过国际标准的寡核苷酸CDMO/CMO服务平台、mRNA/LNP制剂开发和制造平台,能够为核酸药物开发的各个阶段提供一站式寡核苷酸/mRNA CDMO服务、以及LNP制剂开发和制造服务,为国内外超过5000家机构提供产品或服务,现已跻身于全球核酸药CDMO的知名企业行列。锐博生物拥有60多项自主知识产权核酸技术发明,获得了广东省核酸药物工程实验室、广东省核酸医药工程技术研究中心、NMPA颁发的寡核酸药品生产许可等资质,是中国核酸行业的领军企业之一。