【嘉美生物】一 表观遗传学的基本原理
1、表观遗传学概念
表观遗传学(epigenetics)：研究不涉及DNA序列改变的基因表达和调控,并且引起可遗传的表型。或者说是研究从基因演绎为表型的过程和机制的一门新兴的遗传学分支。
2、表观遗传学修饰机制
DNA甲基化、基因组印记、组蛋白密码-染色质重塑、X染色体失活。
3、表观遗传学研究领域
组蛋白（histone）；
转录因子（transcription factor）；
DNA甲基化（DNA methylation）；
基因转录调控（gene transcription regulation）；
细胞核内的信号转导（nuclear signal transduction）；
核内蛋白质的相互作用（nuclear protein interaction）；
生殖细胞（germ cell, oocyte,spermatocyte…）；
干细胞（sterm cell）；
肿瘤（Cancer）；
遗传病（inherited diseases）。
二 甲基化以及甲基化试剂盒
1、甲基化原理
DNA甲基化(DNA methylation)是研究得最清楚、也是最重要的表观遗传修饰形式，主要是基因组DNA上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基间的共价结合，胞嘧啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5-mC)。DNA甲基化能关闭某些基因的活性，去甲基化则诱导了基因的重新活化和表达。 哺乳动物中，CpG序列在基因组中出现的频率仅有1%，远低于基因组中的其它双核苷酸序列。但在基因组的某些区域中，CpG序列密度很高，可以达均值的5倍以上，成为鸟嘌呤和胞嘧啶的富集区，形成所谓的CpG岛。健康人基因组中，CpG岛中的CpG位点通常是处于非甲基化状态，而在CpG岛外的CpG位点则通常是甲基化的。
2、甲基化试剂盒
（1）甲基化原理以及后续检测
甲基化特异性的PCR（methylation-specific PCR, MS-PCR）：它将DNA先用重亚硫酸盐处理，这样未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的不变，随后行引物特异性的PCR。MS-PCR中设计两对引物，并要求：1.引物末端均设计至检测位点结束；2.两对引物分别只能与重亚硫酸盐处理后的序列互补配对，即一对结合处理后的甲基化DNA链，另一对结合处理后的非甲基化DNA链。检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能扩增出片段，则说明该被检测的位点存在甲基化；若用针对处理后的非甲基化DNA链的引物扩增出片段，则说明被检测的位点不存在甲基化。
（2）试剂盒信息
S7820
CpGenome Universal DNA Modification Kit
100 samples
3208
S7824
CpGenome Fast DNA Modification Kit
25 samples
2058
S7821
CpGenome Universal Methylated Control DNA
10ug
3324
S7822
CpGenome Universal Unmethylated DNA Set
10ug
2979
三 染色体免疫沉淀（ChIP）
1、染色质免疫共沉淀技术概念
染色体免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。ChIP不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。
2、染色质免疫共沉淀的步骤
步：用甲醛在体内将DNA结合蛋白与DNA交联
第二步：分离染色体（质），剪切后的DNA小片段与结合蛋白结合
第三步：用特异性抗体与DAN结合蛋白结合，用沉淀法分离复合体。反向交联操
作释放DNA，并消化蛋白质。
第四步：用PCR扩增特异DNA序列，以确定是否与抗体共沉淀。
3、染色质免疫共沉淀试剂盒以及相关试剂
（1）基于琼脂糖微球吸附，通过超声处理染色质的试剂盒
17-295
Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Assay Kit
22 assays
3439
17-245
Acetyl-Histone H3 noprecipitation(ChIP) Assay Kit
22 assays
5508
17-229
Acetyl-Histone H4 uprecipitation (ChIP) Assay Kit
22 assays
5508
17-371
EZ-ChIP
22 assays
4474
17-315
EZ-Zyme Chromatin Prep Kit
22 pre
4129
17-610
Magna ChIP A Chromatin Immunoprecipitation Kit
22 assays
3898
17-611
MagnaChIP G Chromatin Immunoprecipitation Kit
22 assays
3898
17-408
EZ-MagnaChIP A Chromatin Immunoprecipitation Kit
22 assays
4589
17-409
EZ-Magna ChIP G Chromatin Immunoprecipitation Kit
22 assays
4589
根据不同的IgG的亲和力选择，小鼠多用Protein G。兔抗两者都可，也倾向于选择Protein A。
四 端粒以及端粒酶
1、概念：什么是端粒和端粒酶
染色体两末端的结构为端粒，端粒也被科学家称作“生命时钟”，在新细胞中，细胞每分裂一次，端粒就缩短一次，当端粒不能再缩短时，细胞就无法继续分裂而死亡。端粒由串联重复的TTAGGG组成。端粒酶具有对端粒的延伸作用，在没有端粒酶的细胞中，端粒会逐渐缩短直至损害基因；有端粒酶存在的细胞，则该酶会不断补充新的端粒，使之处于一种不断伸缩的动态平衡中。
2、端粒酶检测试剂盒
S7700
TRAPeze Telomerase Detection Kit
122assays
5739
S7710
TRAPEZE RT Telomerase Detection Kit
244assays
7598
S7707
TRAPeze XL Telomerase Detection Kit
112assays
5623
S7701
TRAPeze Telomerase Positive Control Cell Pellet
1 Vial
1369
S7705
TRAPeze 1X CHAPS Lysis Buffer
10ml
908
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