TaqMan miRNA反转录试剂盒采用加A法进行反转录,加A法的反转录效率远高于茎环法,因此,采用该方法可极大的提高检测灵敏度。该试剂盒操作简单,仅需要两步即可轻松完成miRNA的cDNA合成,合成的cDNA可用于所有miRNA的后续定量检测。TaqMan miRNA反转录试剂盒专用于miRNAs分子的反转录试验,转录获得的cDNA产物用于TaqMan定量PCR方法检测miRNAs分子(仅适用于Biorab TaqMan miRNA定量PCR试剂盒,货号:MTTxxxxx)。 TaqMan miRNA反转录试剂盒原理图 产品组成:
储存:请置于-20℃,可保存2年;避免反复冻融。 操作方法: 1.按以下组分在0.2ml EP管中配制应液: miRNA(5~100 ng/μl)————————————4μl 5×TaqMan miRNA RT Solution A—————————1μl注意:不建议使用Total RNA,Total RNA 试验结果通常差于miRNA。 2.在PCR 仪上按以下条件进行加 A 反应: 37℃———————30分钟 85℃———————5分钟 3.反应完毕后,在上述5μl 反应体系中加入如下试剂,并混合均匀。 10×TaqMan miRNA RT Primer—————————2μl 10×TaqMan miRNA RT Solution B———————2μl H2O————————————————————11μl 4.在PCR 仪上按以下条件进行反转录反应: 30℃———————5分钟 55℃———————60min 95℃———————5分钟 获得的cDNA 产物可用于多个目标 miRNA的检测。反转录完毕后获得的miRNA cDNA,可加入20~80μl ddH20 稀释2~5 倍,通常取2μl即可用于 TaqMan miRNA 定量 PCR 试剂盒检测(货号:MTTxxxxx,该试剂盒有一万余种,详细列表可查询 TaqMan miRNA qPCR kit.xls)。 5.利用TaqMan qPCR Kit 对上述miRNA cDNA 产物进行 RealTime PCR 检测。
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